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生物試劑銷售中心幫您辨別胎牛血清的真假！2015/10/23

市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨血清質量的優劣。試劑銷售科技有限公司為您總結如下：一、外觀拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要。1、顏色根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產血清的采血點很分散，大多是由屠戶采

構建穩定細胞株的兩種方法2015/10/23

構建穩定的細胞株，通常有二種方法：一是脂質體轉染后，單克隆篩選穩定細胞株。二是應用逆轉錄病毒，慢病毒轉染，篩選穩定細胞株。脂質體轉染：在轉染24小時后，消化細胞并計數。將細胞種到96孔板，保證每個孔2-3個細胞，這樣才能得到單克隆。待細胞貼壁后，加入抗生素篩選。篩選時間和濃度視細胞而定。一般G418一個星期作用，嘌呤霉素2-3天。脂質體法篩單克隆時間較長，且效率低，大概只有1%。病毒轉染：先要用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，再用病毒轉染目的細胞。包裝病毒視不同類型的病毒而定，一般要3-

細胞培養中常用培養基2015/10/21

1、RPMI-1640Medium,RPMI-1640廣泛應用于哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞，雜交瘤細胞的培養，是目前應用十分廣泛的培養基。主要用于懸浮細胞培養。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。2、MinimumEssentialMedium(MEM),也稱zui低必需培養基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動

細胞培養基分類2015/10/21

細胞培養基分類1.按照培養基的成分來分，培養基按其所含成分，可分為合成培養基、天然培養基和半合成培養基三類。(1)合成培養基。合成培養基的各種成分*是已知的各種化學物質。這種培養基的化學成分清楚，組成成分，重復性強，但價格較貴，而且微生物在這類培養基中生長較慢。如高氏一號合成培養基、察氏(Czapek)培養基等。(2)天然培養基。由天然物質制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養霉菌，后者用于培養細菌。這類培養基的化學成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養豐富，所以常被采用。(3)半合

細胞系的復蘇2015/10/16

一、細胞系復蘇的原則在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內，再次形成胞內結晶損傷細胞。二、細胞系復蘇的主要操作步驟（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。（2）迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內使其*融化，然后在無菌下取出細胞。（3）在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養液后接種于培養瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養，次日更換一次培養液，繼

細胞凍存及復蘇詳談2015/10/16

細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。（一）細胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；2.取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；3.離心1000rpm，5min；4.去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細

細胞成活率形態學觀察法及檢測法2015/10/16

細胞成活率形態學觀察法及檢測法細胞成活率，判斷之形態學觀察法：胞內出現顆粒或空泡。細胞內如果出現顆粒物質，表明細胞處于非健康狀態。同樣，細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。細胞喪失雙折射性：1)如果發生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環），則提示該細胞已經死亡，即zui終干枯死亡。2)如果發生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。3)怎樣去除死細胞？單層培養的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處

淺談ELISA操作步驟2015/10/14

酶聯免疫吸附實驗材料，試劑，溶液1．酶標板，100μltip頭，1mlEp管，濕盒2．包被稀釋液（0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉buffer,pH9.6）碳酸鈉0.15g,碳酸氫鈉0.29g,疊氮鈉0.02g,加雙蒸水至100ml,調至pH9.63.封閉液(5%小牛血清/PBS溶液)小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml4.洗滌液(PBST,pH7.4)NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml

人I型膠原蛋白（COL-1）Elisa試劑盒注意事項2015/10/14

【人I型膠原蛋白(COL-1)Elisa試劑盒樣本要求】1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。【人I型膠原蛋白(COL-1)Elisa試劑盒注意事項】1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存

淺談ELISA試劑盒基本原理2015/10/13

生物試劑銷售中心ELISA試劑盒基本原理是抗原或抗體預先結合到某種固相載體表面；測定時，將待測樣品(含待測抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按一定程序與結合在固相載體上的抗原或抗體反應形成抗原抗體復合物；反應終止時，固相載體上酶標抗原或抗體被結合量(免疫復合物)與待測標本中待檢抗體或抗原的量呈一定比例；經洗滌去除反應液中其他物質，加入底物進行顯色，zui后通過定性或定量分析有色產物量即可確定樣品中待測物質含量。

淺談ELISA的原理及類型2015/10/13

ELISA的原理及類型1.ELISA的原理ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，

胎牛血清在細胞培養中的主要作用2015/10/12

一、胎牛血清在細胞培養基中的主要作用胎牛血清是細胞培養中用量zui大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋

HyClone胎牛血清培養肌細胞的兩種方法2015/10/10

HyClone胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzymedisperse)。1、貼塊法方法：動物經頸動脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內膜即內皮細胞迅速撕下中膜內、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養瓶加入20%HyClone胎牛血清的培養液，再放回培養箱

ELISA試劑盒實驗不可忽視的小細節2015/10/08

ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。主要有：直接法、雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法、應用親和素和生物素系統（ABS）等。ELISA試劑盒必須遵守以下3個核心原理：（1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性；（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；（3）酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免

血清的保存及使用注意事項2015/09/30

血清是細胞培養中zui重要的元素之一。在實驗室操作中要注意及處理方法：1.血清保存:建議血清應保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。3.血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成

Gibco胎牛血清保存過程中的問題處理方法2015/09/29

一、保存Gibco胎牛血清的方法？我們建議Gibco胎牛血清應保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝Gibco胎牛血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。二、何解凍Gibco胎牛血清才不會使產品質量受損？將Gibco胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。三、Gibco胎牛血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？Gibco胎牛血清中沉淀物的出現有許多種原因，但zui普

細胞株的傳代與培養2015/09/24

培養細胞株傳代根據不同細胞采取不同的方法。貼壁生長細胞如COS-7、CHO等用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞如PC12用直接吹打即可傳代。一、用品(1)0.25％胰蛋白酶，全培養液(2)滴管，離心管，培養瓶(皿)，培養瓶蓋，注射器，計數6二、步驟(1)貼壁細胞的消化法傳代：①吸除瓶內舊培養液。②以50ml培養瓶為例，向瓶內加入2-3ml胰蛋白酶，輕輕搖動培養瓶，使消化液流遍所有細胞表面。③消化在37C或室溫25C以上環境下進行。消化后把培養瓶放置顯微鏡下進行觀察．發現胞質回縮、細胞間隙增大后。應

ELISA試劑盒實驗八大禁忌2015/09/21

1．ELISA試劑盒從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝進密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，ELISA試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其正確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數目多，推薦使用排槍加樣。4．如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數（×5×n）。5．封板膜只

HEPES緩沖液使用方法簡介2015/09/15

在細胞培養過程中，經常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養條件中，若加入HEPES，可防止培養基內pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。HEPES分子量為238.31，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。HEPES使用方法有兩種：(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養液中，再過濾除菌。每

SH-SY5Y細胞培養說明，人神經母細胞瘤細胞2015/09/06

細胞介紹SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉移灶的神經母細胞瘤SK-N-SH細胞系經三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X106細胞/cm2。細胞特性1）來源：腦神經母細胞瘤，轉移部位骨髓2）形態：上皮細胞樣3）含量：1x106個/mL4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性5）規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細