細(xì)胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測法

細(xì)胞成活率，判斷之形態(tài)學(xué)觀察法：

胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或空泡。

細(xì)胞內(nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì)，表明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。

同樣，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細(xì)胞處于非健康狀態(tài)。

細(xì)胞喪失雙折射性：

1)如果發(fā)生在單層細(xì)胞：一個具有雙折射性的正常細(xì)胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細(xì)胞邊緣成暈環(huán)），則提示該細(xì)胞已經(jīng)死亡，即zui終干枯死亡。

2)如果發(fā)生在懸浮細(xì)胞：正常懸浮細(xì)胞清晰透明，如胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細(xì)胞受損，甚至死亡。

3)怎樣去除死細(xì)胞？單層培養(yǎng)的細(xì)胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處理。

4)懸浮細(xì)胞或原代培養(yǎng)細(xì)胞則要通過密度離心（如Ficoll梯度）方法收集死細(xì)胞。

細(xì)胞成活率檢測實驗:

即刻檢測實驗——

染料柜染實驗：原理——萘黑、臺盼藍(lán)以及很多其他染料均不能透過活細(xì)胞。概要——將細(xì)胞懸液與染料混勻，在低倍顯微鏡下檢查。材料包括無菌材料,即細(xì)胞；生長液；0.25%胰酶；PBSA.非滅菌材料即：血細(xì)胞計數(shù)板；生存力染料；巴斯德吸管；顯微鏡；手執(zhí)計數(shù)器。操作步驟：

1)用胰蛋白酶消化或離心，重懸制備高深度的細(xì)胞懸液

2)取一塊干凈的血細(xì)胞計數(shù)板，將蓋玻片固定在適當(dāng)位置上。

3)將一<滴細(xì)胞懸液和一滴（臺盼藍(lán)）或四滴（萘黑）染料混勻/li>

4)加至血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)室中。

5)靜置1~2min（但不要放置很久，否則活細(xì)胞會受到損傷而吸收染料）。

6)將計數(shù)板置于顯微鏡下，用10倍物境找到計數(shù)網(wǎng)格。

7)計數(shù)細(xì)胞總及著色細(xì)胞的數(shù)目。

8)清洗血細(xì)胞計數(shù)板，放入盒內(nèi)。

實驗分析-計算未著色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，該數(shù)字即為本方法所得出的細(xì)胞生存力百分?jǐn)?shù)。

據(jù)統(tǒng)計，原代培養(yǎng)細(xì)胞成活率一般為50%~90%。細(xì)胞系一般為90%~100%存活。凍融細(xì)胞一般為50%~80%存活。

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