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細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。
（一）細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的zui終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中隔夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。
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T2細胞 | 1640培養基+10%胎牛血清 |
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MC38 細胞，結腸癌細胞 | 貼壁 1640培養基+10%FBS |
NB4（NB-4）人急性早幼粒白血病細胞 | GIBCO(1640+10%胎牛血清) |
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NCI-H526 來源美國ATCC | RPMI-1640+10%FBS 懸浮類細胞 |
TC-1細胞 | GIBCO(1640+10%胎牛血清) |
CCRF-CEM 細胞 | |
HT-1080細胞 | |
MCF-7細胞 | MEM培養基+10% FBS |
H22細胞 | 1640+10% FBS |
EA.hy926，人臍靜脈細胞融合細胞 | |
小鼠骨髓瘤細胞 Sp2/0 |
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