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D-熒光素原理D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,尤其是體內活體成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下,熒光素(底物)能夠被氧化發光。當熒光素過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性(見下圖)。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質粒轉染入細胞后,導入研究動物如大、小鼠體內,之后注入熒光素,通過生物發光成像技術(BLI)來檢測光強度變化,從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體
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轉鐵蛋白(Transferrin)------無血清細胞培養添加物背景介紹轉鐵蛋白又名運鐵蛋白(Transferrin,TRF、Tf),負責運載由消化管吸收的鐵和由紅細胞降解釋放的鐵。以三價鐵復合物(Tf-Fe3+)的形式進入骨髓中,供成熟紅細胞的生成。轉鐵蛋白主要存在于血漿中,血漿中的轉鐵蛋白供應機體絕大部分組織的鐵,而在其不能到達的部位,由這些組織自己合成的轉鐵蛋白在局部產生轉鐵作用。圖1:轉鐵蛋白的結構人轉鐵蛋白(HumanTransferrin)主要在肝臟合成,是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G(IgG)——模擬抗體活性,神似抗體結構免疫球蛋白免疫球蛋白(Ig)指具有抗體(Ab)活性或化學結構,與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白分為五類,即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。圖1五類免疫球蛋白結構示意圖IgG簡介免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG,IgG)是血清中免疫球蛋白主成分,約占血清中免疫球蛋白總
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qPCR常見問題及解決方案對于從事分子生物學研究的實驗猿來說,RT-qPCR實驗可謂是老生常談了??此骑L平浪靜,只需“RNA提取-反轉錄-熒光定量”這些按部就班的操作,實則險象環生,一丁點的出錯都有可能讓我們懷疑人生。即便如此,在CNS的召喚下我們仍舊一遍遍的重復、重復、再重復。小翊深有體會,為此嘔心瀝血整理出來常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實驗的幾個常見問題,并給出了可能的原因和解決方案,希望大家能夠順利度過RT-qPCR大關。RT-qPCR實驗中,大家或多或少會遇到擴增曲線異常
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抗體親和純化系列產品概述ProteinA、ProteinG是常應用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。將ProteinA、G分別固定在不同的介質上,或同時將ProteinA、G共價偶聯到介質表面,是從腹水、細胞培養物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具。ProteinL源于細菌,能更廣泛地結合各種類型以及亞類的免疫球蛋白,包括所有類型的IgG和單鏈可變區(ScFv)以及Fab片段。該蛋白只與抗體的kappa鏈結合而不會影響抗體的抗原結合位點,這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比,能更廣泛地結合
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Hifair Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
Hifair®Ⅲ1stStrandcDNASynthesisSuperMixforqPCR(gDNAdigesterplus)——Yeasen第三代逆轉錄酶預混液,高質量cDNA的*!研發背景RT-qPCR是一個多步驟連貫實驗,逆轉錄的實驗結果只能通過后續qPCR進行判定,因此這一過程的成功與否十分關鍵。實驗過程中,你是否有遇到過這些問題?1.逆轉錄效率低導致后續qPCR實驗結果Ct值偏大?2.RNA具有復雜二級結構或GC含量高導致逆轉錄失???3.逆轉錄產品組分多,加樣麻煩誤差還大?。。。。。。 -
【干貨+試用】一文get核酸片段化酶知識要點近小翊在后臺收到一封留言,說建庫的片段化儀器壞了,不能做超聲打斷,問有沒有其他核酸打斷的方法推薦。核酸打斷的方法可以分為機器法和試劑法。其中機器法包含接觸式和非接觸式,接觸式主要包括探頭式和水浴超聲兩大類,這類方法比較實惠,但是直接接觸樣本會導致樣本損耗和污染,非接觸式主要包括Diagennode和Covaris這兩個品牌,這類儀器和耗材的成本太高,單個樣本的耗材成本達20-50元。試劑法指的是采用片段化酶對核酸進行打斷,這類方法成本較低,操作簡便省時
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搞事情啊,翊圣請來了四位ECL超級魔術師??老板,都說你家ECL功能強,我給個飛克級的蛋白,能變出條帶嗎?辦不到??老板,我多給點小費,把蛋白提高到皮克級,能不能變出條帶?還是辦不到??那也太差勁了,還想不想混了!不,小伙,你理解錯了,是通通不是問題??!跟著我往下看!點亮您的印跡膜,一觸即發ECL試劑,即化學發光法辣根過氧化物酶(HRP)底物,是目前Westernblotting檢測中為靈敏的試劑。目前市場上普通ECL試劑在使用過程中經常出現易淬滅、高背景、不穩定以及低豐度蛋白難以檢測等問題,影