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一、WesternBlot實驗原理蛋白免疫印跡(WesternBlot,WB)是將蛋白質經電泳分離后轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測的技術。完整的WB流程,如下圖所示,包含樣本制備、SDS-PAGE、轉膜、抗體結合、蛋白檢測等5個大步驟。二、試劑準備詳見文末附錄。三、實驗步驟1.樣本制備1)融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。2)貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ
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1.什么是RIPA裂解液?RIPA裂解液(RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer,放射免疫沉淀法裂解緩沖液)是一種傳統的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液,其原理為利用表面活性劑等裂解細胞膜(包括核膜),從組織或細胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規的WB、IP、co-IP等實驗。2.RIPA裂解液里有什么?RIPA裂解液的配制方法有很多種,主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細胞膜和蛋白
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BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸,拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中,如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測的結果很差,那么您的樣本可能遭受了核酸污染。如何去除核酸?超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法,但存在諸多缺陷(表1)。表1核酸去除,超聲法與DNase/RNase酶法優缺點超聲法DNase/RNase酶法優點利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內切酶活性,可在溫和條件下,較好的消化核酸缺點僅能
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YeaRed無毒核酸染料,您的安全科研助手還有實驗室用EB嗎?拒絕EB!用無毒核酸染料YeaRed!溴化乙錠(Ethidiumbromide,EB)是應用早的的核酸染料,并且由于其價格便宜、靈敏度高,早期被實驗者廣泛應用。但其分子量小,很輕易就能穿透細胞膜,屬于誘變劑,具有高致癌性,對人體潛在危害非常大。實驗者使用時需要謹慎再謹慎,另外,單獨的EB區占用了實驗室的大塊空間,廢膠、廢液的處理費時、費力又費錢,以及不小心碰到EB區的東西可能再也不能重見天日了,真是讓人又愛又恨。隨著技術的發展,人們對
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PeptideHydrogelSuitablefor3DCellCulture——3D多肽水凝膠超越基質膠(matrigel)Yeasen多肽水凝膠產品是由一種由16個氨基酸組成的多肽,在鹽離子存在情況下自發組裝成的水凝膠支架結構。多肽的大小通常在5nm左右,是親水性和疏水性氨基酸殘基交替排列組成的兩性分子肽段,能形成折疊片結構,并自組裝形成納米纖維,這些納米纖維相互交織在一起形成基質并進一步形成含水量超過99.5%的水凝膠支架(見圖1)。Yeasen多肽水凝膠無需通過調節聚合物和交聯劑的量來獲
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關鍵詞:ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠德國ChromoTek公司成立于2008年,擁有德國制造的良好質量,致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發與研究,公司擁有強大的研發團隊,有*生物制劑,主要使命是花費較少的時間和成本,使客戶獲得得高質量的實驗數據。產品包括單克隆抗體、重組單域抗體、熒光抗體、GFP或RFP連接蛋白等。德國ChromoTek是一家專業研發生產標簽抗體的公司,利用羊駝抗體的特異性解決了傳統GFP/RFP抗體分子量過大、轉染表達效率低的問題,研發
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關鍵詞:ChromoTek、GFP、RFP、免疫沉淀、IP、抗體、瓊脂糖、磁珠*(ChromotekGFP-Traps已被600多篇同行評議的近期文獻引用)產品名稱產品貨號規格報價(元)*(元)GFP-Trap®_A,coupledtoagarosegta-2020rxns(500µl)63003300GFP-Trap用于免疫沉淀(IP)德國ChromoTek是一家專業研發生產標簽抗體的公司,利用羊駝抗體的特異性解決了傳統GFP/RFP抗體分子量過大、轉染表達效率低的問題,研發出分子量只有15k
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單克隆抗體生產相關載體--pEE系列pEE系列載體是Lonza生物公司研發的GlutamineSynthetase(GS,谷氨酰胺合成酶)基因表達系統,利用谷氨酰胺合成酶篩選標記,能夠高水平的在哺乳細胞內表達目的基因,zui常用的有pEE6.4和pEE12.4表達載體。GS酶是生物體內以谷氨酸和氨為底物合成谷氨酰胺的酶。GS酶的活性能夠被甲硫氨酸砜亞胺(methioninesulphoximine,MSX)選擇性的抑制。一些哺乳動物細胞,例如小鼠骨髓瘤細胞(NSO細胞系)無法表達GS,所以在不添