無標記定量方法：基于質譜的蛋白質定量分析策略檢測技術服務詳情介紹

在現代生命科學研究中，dànbáizhì定量是深入理解生理功能、疾病機制及藥物靶點的關鍵手段。不同于僅檢測蛋白是否存在，定量分析能揭示蛋白表達水平的動態變化，對于生物標志物篩選、疾病亞型分類和機制研究具有重要價值。質譜（Mass Spectrometry, MS）作為dànbáizhì組學的核心技術，其定量策略大致可分為標記定量（Label-Based）和無標記定量（Label-Free）。其中，無標記定量方法因其流程簡化、樣本適應性強和成本控制優勢，在近年來獲得了廣泛關注與應用。

一、什么是無標記定量（Label-Free Quantification, LFQ）？

1、原理概述

無標記定量是不依賴任何同位素或化學標記的質譜定量策略。研究者直接對不同樣本中的蛋白酶解產物進行質譜分析，利用MS1階段的離子峰強度或肽段譜圖數量（spectral counting）來估算dànbáizhì的相對豐度。與標記定量方法相比，LFQ避免了標記步驟的干擾和成本，提高了實驗的靈活性，尤其適合探索性研究和臨床大隊列樣本的初步篩查。

2、核心優勢

• 無需特殊試劑：省去了標記試劑的采購和優化步驟，簡化實驗流程。

• 樣本類型廣泛：適用于細胞、組織、血清、尿液等復雜樣品。

• 成本效益高：更適合大樣本量、多條件的實驗設計。

• 方法重復性強：在穩定儀器平臺和優化流程支持下，數據具有良好一致性。

二、LFQ實驗流程及關鍵步驟

1、樣品處理與蛋白酶解

LFQ對實驗前處理的一致性要求較高。樣品需在相同條件下提取蛋白、定量、還原烷基化，并使用yídànbáiméi進行規范酶解。實驗過程中的每一步都需嚴格控制批間差異，以避免非生物學變異干擾后續分析。

2、LC-MS/MS數據采集

常用的數據采集模式包括DDA（Data-Dependent Acquisition）與DIA（Data-Independent Acquisition）：

• DDA模式依賴于質譜對高強度信號的實時選擇，適合標準dànbáizhì組分析；

• DIA模式將所有肽段離子信息連續采集，提高了低豐度蛋白的覆蓋率與數據一致性。

高分辨率質譜平臺（如Orbitrap、TIMS-TOF）對無標記定量的準確性和深度具有決定性影響。

3、數據處理與定量分析

主流LFQ定量分析軟件如MaxQuant、Proteome Discoverer、DIA-NN等，提供從原始數據讀取、峰面積提取、歸一化到統計分析的一體化流程。

??數據處理需重點關注以下幾個方面：

• 對齊和歸一化：不同樣本間保留時間的對齊及強度歸一化，降低系統偏差；

• 缺失值處理：合理*或剔除缺失值，避免誤判差異蛋白；

• 統計分析：常用t檢驗、ANOVA等方法識別顯著差異蛋白；

• 功能注釋：結合GO/KEGG等數據庫進行富集分析，挖掘潛在生物學意義。

三、無標記定量方法的典型應用場景

無標記定量在生物醫學研究中有廣泛用途，尤其在以下領域表現突出：

• 腫瘤組織蛋白表達分析：比較癌癥患者腫瘤組織與鄰近正常組織的蛋白表達差異，初步篩選潛在生物標志物。

• 藥物處理前后蛋白變化監測：評估藥物干預對細胞蛋白表達的影響，輔助解釋藥物作用機制與副作用風險。

• 疾病亞型分型研究：分析不同疾病亞型間的dànbáizhì組差異，為個性化治療提供數據支持。

無標記定量作為蛋白組學中高效、靈活的定量手段，正逐步從實驗室研究走向轉化醫學與產業化應用。它降低了質譜定量的技術門檻，為更多生命科學研究者打開了蛋白表達量化的大門。在研究不斷精細化、樣本來源日趨復雜的jīntiān，LFQ的策略與工具也在持續演進。科學家需要結合研究目標、樣本條件與資源狀況，合理選擇zuì適合的定量方法。百泰派克生物科技面向科研與產業客戶提供高質量的定量蛋白組分析服務，助力科研從數據走向發現。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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