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冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)2024/05/28: 1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動(dòng)洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復(fù)將切片浸沒(méi)在升滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盆中，置于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)條件：中火8min至沸——停火8min保溫——中低火7min（整個(gè)過(guò)程需防止修復(fù)液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A

脂質(zhì)體的制備方法2024/05/24: 脂質(zhì)配方的性質(zhì)取決于具體成分（陽(yáng)離子、陰離子和中性脂質(zhì)）。但是，同一種制備方法適用于所有成分的脂質(zhì)囊泡。制備流程的一般要素包括制備用于水合的脂質(zhì)、攪拌水合以及減小粒徑，從而獲得均勻分布的囊泡。今天介紹制備用于水合的脂質(zhì)：當(dāng)用混合脂質(zhì)成分制備脂質(zhì)體時(shí)，必須先溶解脂質(zhì)并混合于有機(jī)溶劑中，以確保獲得均勻的脂質(zhì)混合物。通常，該過(guò)程使用氯仿或氯仿:甲醇混合液完成。目的在于使脂質(zhì)混合，獲得澄清的脂質(zhì)溶液。一般情況下，脂質(zhì)溶液的制備濃度為10-20mg脂質(zhì)/ml有機(jī)溶劑，但是，在脂質(zhì)溶解度和混合程度可接受的情

免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)原理2024/05/17: (1)免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應(yīng)，對(duì)某個(gè)特定蛋白純化富集的方法，主要過(guò)程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的擴(kuò)展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結(jié)合，此時(shí)如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會(huì)一同被拉下來(lái)，隨后利用SDS-PAGE，WesternBl

ACK紅細(xì)胞裂解液的原理及使用2024/05/14: 原理：氯化銨是紅細(xì)胞裂解液的主要效應(yīng)物質(zhì)，氨根離子不能通過(guò)細(xì)胞膜，而其他離子可以通過(guò)，造成細(xì)胞內(nèi)外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會(huì)擴(kuò)散至細(xì)胞內(nèi)，使紅細(xì)胞膨脹，達(dá)到裂解的效果。使用說(shuō)明：組織細(xì)胞樣品：1.新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液；2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；4.收集沉淀部分，加入H

透析袋的使用技巧2024/05/08: 1）除鹽透析時(shí)將高鹽的樣本加入透析袋中，夾緊，用你選擇的保存液進(jìn)行透析，一般在2-8度透析過(guò)夜，中間要更換一到兩次透析液，另外透析液體積盡量大些。先把透析液放進(jìn)容器中（容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度），再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸，溶液的置換面積最大，置換速度最快。如果夾子很穩(wěn)，那就夾好，先把透析液放進(jìn)容器中（容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度），再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸，溶液

膠原酶I型的配置方法2024/05/06: 膠原酶儲(chǔ)存液的配制：向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液,含Ca2+、Mg2+)，輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml(即1000×)的儲(chǔ)存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過(guò)濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。膠原酶工作液的配制：根據(jù)需要的濃度，將膠原酶I型溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校鏒MEM或PBS。對(duì)于I型膠原酶，一般使用濃度為0.075%至0.1%。如果使用DMEM作為溶劑，可以

免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理2024/04/30: 免疫熒光實(shí)驗(yàn)的主要步驟包括細(xì)胞片制備、固定及通透（或稱為透化）、封閉、抗體孵育及熒光檢測(cè)等。細(xì)胞片制備（通俗的說(shuō)法是細(xì)胞爬片）是免疫熒光實(shí)驗(yàn)的第一步，細(xì)胞片的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)的成敗至關(guān)重要，原因很簡(jiǎn)單，如果發(fā)生細(xì)胞掉片，一切都無(wú)從談起。這一步關(guān)鍵的是玻片（SlidesorCoverslips）的處理以及細(xì)胞的活力，有人根據(jù)成功經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出許多有益的細(xì)節(jié)或小竅門，非常值得借鑒。固定和通透步驟最重要的是根據(jù)所研究抗原的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)墓潭ǚ椒ǎ线m的固定劑和固定程序?qū)τ讷@得好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是非常重要的。免疫熒光中

細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理2024/04/25: 細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過(guò)程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見(jiàn)凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀或新月?tīng)罘植肌?nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜進(jìn)一步融合將細(xì)胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細(xì)胞吞噬消化。在凋亡過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)容物

什么是夾心 ELISA？2024/04/02: 夾心ELISA是一種常用于檢測(cè)和定量免疫測(cè)定中抗原的ELISA。它是一種酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，使用兩種抗體：捕獲抗體和檢測(cè)抗體。在這種技術(shù)中，樣品中的抗原在抗體之間結(jié)合。ELISA的目的是檢測(cè)樣品中靶抗原的存在。因此，在夾心ELISA的情況下，靶抗原在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間結(jié)合。在程序開(kāi)始時(shí)，捕獲抗體已經(jīng)固定在表面上。然而，檢測(cè)抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結(jié)合到靶抗原上的不同位置。此外，捕獲抗體和靶標(biāo)抗體不干擾彼此的結(jié)合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟包括用捕獲抗體涂覆表面

細(xì)胞爬片使用前需要做哪些準(zhǔn)備？2024/03/26: 細(xì)胞爬片又名玻片，是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng)，主要用于組織學(xué)，免疫組織學(xué)，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等。除了在實(shí)驗(yàn)中的使用，實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備也十分重要，讓我們一起來(lái)看看使用前需要做哪些準(zhǔn)備吧！用前準(zhǔn)備：1、蓋玻片的選擇爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用細(xì)胞爬片，價(jià)格比較昂貴但是細(xì)胞貼壁牢固，拍出照片效果好；2、爬片的剪裁可根據(jù)自己的需要，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色剪裁成合適大小，置于6孔板、12孔板或24孔板；3、爬片的使用前處理將剪裁好的

常用的培養(yǎng)基有哪幾款？2024/03/19: 1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基（BasalMediumEagle），1955年Eagle設(shè)計(jì)，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基又稱Eagle培養(yǎng)基（MinimalEssentialMedium），1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本的培養(yǎng)

凍存管的使用注意事項(xiàng)2024/03/12: 凍存管保存環(huán)境1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個(gè)月。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃保存，12個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。3、已經(jīng)接種的凍存管在-80℃保存，24個(gè)月內(nèi)可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時(shí)間1、未經(jīng)使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經(jīng)接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細(xì)菌純培養(yǎng)物中挑取新鮮培養(yǎng)物配成大約為3-4麥?zhǔn)媳葷岫鹊木鷳乙航臃N與菌種保存管中。2、擰緊保存管，來(lái)回顛倒4-5次使細(xì)菌乳化，不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃

酶聯(lián)免疫法是什么意思2024/03/06: 酶聯(lián)免疫法全稱為酶聯(lián)免疫法吸附測(cè)定法，英文縮寫為ELISA，是一種酶標(biāo)記測(cè)定方法，可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的定量的實(shí)驗(yàn)診斷方法。1、原理：已經(jīng)被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗體與過(guò)量待檢測(cè)的抗體或抗原反應(yīng)，一部分結(jié)合形成固相抗原抗體復(fù)合物，另一部為多余的游離抗體或抗原，通過(guò)洗板，保留固相抗原抗體復(fù)合物，洗去多余游離抗體或抗原，再加入酶標(biāo)記的抗體，形成固相抗原抗體酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，洗去多余酶標(biāo)抗體，加入底物，此時(shí)酶催化底物顯色，顏色的深淺與待測(cè)

超濾離心管的使用方法2024/02/20: 超濾離心管是一種采用優(yōu)化過(guò)濾結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)方式，減少濃差極化，降低了膜易污染堵塞機(jī)率，加快了離心速度，縮短了離心所需的時(shí)間；超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理。超濾離心管具體用法：(1)選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3，認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書(shū)，注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。(2)新買來(lái)的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量過(guò)膜，冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需

PCR八聯(lián)排管的使用方法及注意事項(xiàng)2024/01/31: 一、使用方法：1.樣本制備：從樣品中提取DNA，確保其質(zhì)量和濃度適合PCR反應(yīng)。2.試劑混合：準(zhǔn)備PCR反應(yīng)體系，包括模板DNA、引物、酶和緩沖液，并混合均勻。3.充填反應(yīng)管：將反應(yīng)體系均勻地充填到八連管中。4.密封反應(yīng)管：將塑料蓋密封到八連管上，以防止反應(yīng)體系中的揮發(fā)物外泄或污染。5.放置在PCR儀中：放置八連管在PCR儀中，并按照所選程序運(yùn)行PCR反應(yīng)。6.PCR產(chǎn)物分析：根據(jù)需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析，例如凝膠電泳、測(cè)序或定量PCR等。二、注意事項(xiàng)：1.防止污染：在PCR前，必須非常小心，以

96孔深孔板的適用范圍2024/01/25: ①儲(chǔ)存樣品：可以替代常規(guī)的1.5ml離心管儲(chǔ)存樣品，并且儲(chǔ)存時(shí)擺放整潔，節(jié)省空間，儲(chǔ)存量大，可耐受-80℃冰箱。②處理樣品：可以結(jié)合排槍、高通量自動(dòng)液體操作儀器和軟件，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品的高通量操作，比如沉淀蛋白，液液萃取。大大提高樣品處理的效率。PP材質(zhì)更可以耐受121℃高溫高壓滅菌處理。③進(jìn)樣操作：通用于各種自動(dòng)進(jìn)樣器，可直接放在自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品倉(cāng)中進(jìn)樣，相比傳統(tǒng)的進(jìn)樣小瓶，不但可以成倍樣品倉(cāng)的樣品擺放數(shù)量，另外還實(shí)現(xiàn)了樣品在96孔板上處理后直接進(jìn)樣，省去了來(lái)回吸取樣品，擺放樣品，蓋蓋子，插內(nèi)插

細(xì)胞傳代培養(yǎng)及其操作步驟2024/01/17: 原代細(xì)胞培養(yǎng)成功以后，需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，否則細(xì)胞會(huì)因生存空間不足或密度過(guò)大，營(yíng)養(yǎng)障礙影響細(xì)胞生長(zhǎng)。細(xì)胞由原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過(guò)程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細(xì)胞允許培養(yǎng)的細(xì)胞擴(kuò)增(形成細(xì)胞株)，可以進(jìn)行細(xì)胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細(xì)胞和分化特征。傳代細(xì)胞形成細(xì)胞株的最大利處在于提供了大量持久的實(shí)驗(yàn)材料，便于實(shí)驗(yàn)。操作步驟：（1）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。（2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量，以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進(jìn)行消

細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)2024/01/10: 所需材料：裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸，以及擁有基礎(chǔ)設(shè)施的細(xì)胞間。操作步驟：1.紫外照射滅菌后，我們應(yīng)該穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。2.從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶（一般選擇處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞），用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶到超凈臺(tái)。3.打開(kāi)蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（注意從側(cè)壁加入，以免沖掉細(xì)胞），棄去PBS緩沖液。4.可用移液器加入1-2ml胰酶（具體量根據(jù)實(shí)

PCR產(chǎn)品如何選擇？2024/01/04: PCR單管：在樣品量少時(shí)使用，可根據(jù)樣本數(shù)量靈活使用。管身和管蓋相連，易與微量離心管搞混，但不可混用。PCR管管壁較薄，有利于保證PCR擴(kuò)增中熱傳導(dǎo)的速度和均勻，但也因此無(wú)法承受較大的離心力；微量離心管管壁比較厚，滿足離心要求，但也導(dǎo)致了傳熱慢、不均勻。PCR八連管：在樣本量增大時(shí)可選擇八連管。一般有透明和白色雙色可選擇，分別適用于普通PCR和qPCR。PCR板：PCR板在批量處理樣本時(shí)使用，適用性廣，看使用不同自動(dòng)化應(yīng)用。板孔邊有數(shù)字、字母編碼，便于標(biāo)記和識(shí)別。有透明、彩色透明和白色款，彩色和

在PCR反應(yīng)體系中添加劑DMSO的作用2023/12/27: DMSO主要用于高GC含量的模板擴(kuò)增，可能的機(jī)理是改善GC含量高的DNA的變形情況，降低其二級(jí)結(jié)構(gòu)，使得聚合酶在二級(jí)結(jié)構(gòu)處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴(kuò)增一些難擴(kuò)的模板。當(dāng)體系中加入DMSO時(shí)，可適當(dāng)降低退火溫度。在實(shí)踐中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能因各種原因而失敗，通常表現(xiàn)為兩個(gè)問(wèn)題，一是目的模板的擴(kuò)增量太少，二是非目的基因擴(kuò)增太多。這種情況研究人員通常會(huì)在反應(yīng)體系中加入合適的添加劑進(jìn)行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動(dòng)。下面是幾種常用的添加劑以及它們的

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