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冰凍切片免疫熒光實驗2024/05/28

1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復緩沖液（PH8.0）的修復盆中，置于微波爐內進行抗原修復，修復條件：中火8min至沸——停火8min保溫——中低火7min（整個過程需防止修復液過度蒸發，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發熒光淬滅劑A

脂質體的制備方法2024/05/24

脂質配方的性質取決于具體成分（陽離子、陰離子和中性脂質）。但是，同一種制備方法適用于所有成分的脂質囊泡。制備流程的一般要素包括制備用于水合的脂質、攪拌水合以及減小粒徑，從而獲得均勻分布的囊泡。今天介紹制備用于水合的脂質：當用混合脂質成分制備脂質體時，必須先溶解脂質并混合于有機溶劑中，以確保獲得均勻的脂質混合物。通常，該過程使用氯仿或氯仿:甲醇混合液完成。目的在于使脂質混合，獲得澄清的脂質溶液。一般情況下，脂質溶液的制備濃度為10-20mg脂質/ml有機溶劑，但是，在脂質溶解度和混合程度可接受的情

免疫共沉淀實驗原理2024/05/17

(1)免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：利用抗原抗體特異性反應，對某個特定蛋白純化富集的方法，主要過程包括捕獲和固定。(2)免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）：CoIP是在IP實驗的基礎上進行的擴展，主要用于蛋白之間的互作研究，常被用于鑒定特定蛋白復合物的中已知或未知的蛋白組分。其原理是基于抗體與抗原（靶蛋白）之間的特異性結合，此時如果樣品溶液中存在能與靶蛋白相互作用的目的蛋白，會一同被拉下來，隨后利用SDS-PAGE，WesternBl

ACK紅細胞裂解液的原理及使用2024/05/14

原理：氯化銨是紅細胞裂解液的主要效應物質，氨根離子不能通過細胞膜，而其他離子可以通過，造成細胞內外的離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至細胞內，使紅細胞膨脹，達到裂解的效果。使用說明：組織細胞樣品：1.新鮮組織經胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液，離心棄去上清液；2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；4.收集沉淀部分，加入H

透析袋的使用技巧2024/05/08

1）除鹽透析時將高鹽的樣本加入透析袋中，夾緊，用你選擇的保存液進行透析，一般在2-8度透析過夜，中間要更換一到兩次透析液，另外透析液體積盡量大些。先把透析液放進容器中（容器的直徑小于透析袋長度），再將夾好的透析袋豎直放進去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個透析袋都與透析液接觸，溶液的置換面積最大，置換速度最快。如果夾子很穩，那就夾好，先把透析液放進容器中（容器的直徑小于透析袋長度），再將夾好的透析袋豎直放進去，這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的，幾乎整個透析袋都與透析液接觸，溶液

膠原酶I型的配置方法2024/05/06

膠原酶儲存液的配制：向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液,含Ca2+、Mg2+)，輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。使用前于冰上解凍，避免反復凍融。膠原酶工作液的配制：根據需要的濃度，將膠原酶I型溶解在適當的溶劑中，如DMEM或PBS。對于I型膠原酶，一般使用濃度為0.075%至0.1%。如果使用DMEM作為溶劑，可以

免疫熒光實驗原理2024/04/30

免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透（或稱為透化）、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。細胞片制備（通俗的說法是細胞爬片）是免疫熒光實驗的第一步，細胞片的質量對實驗的成敗至關重要，原因很簡單，如果發生細胞掉片，一切都無從談起。這一步關鍵的是玻片（SlidesorCoverslips）的處理以及細胞的活力，有人根據成功經驗總結出許多有益的細節或小竅門，非常值得借鑒。固定和通透步驟最重要的是根據所研究抗原的性質選擇適當的固定方法，合適的固定劑和固定程序對于獲得好的實驗結果是非常重要的。免疫熒光中

細胞凋亡檢測實驗原理2024/04/25

細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態學和生物化學特征。在形態上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內皺縮、胞漿濃縮、內質網擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內質網和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過程中細胞內容物

什么是夾心 ELISA？2024/04/02

夾心ELISA是一種常用于檢測和定量免疫測定中抗原的ELISA。它是一種酶聯免疫吸附測定，使用兩種抗體：捕獲抗體和檢測抗體。在這種技術中，樣品中的抗原在抗體之間結合。ELISA的目的是檢測樣品中靶抗原的存在。因此，在夾心ELISA的情況下，靶抗原在捕獲抗體和檢測抗體之間結合。在程序開始時，捕獲抗體已經固定在表面上。然而，檢測抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結合到靶抗原上的不同位置。此外，捕獲抗體和靶標抗體不干擾彼此的結合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟包括用捕獲抗體涂覆表面

細胞爬片使用前需要做哪些準備？2024/03/26

細胞爬片又名玻片，是指讓玻片浸在細胞培養基內，細胞在玻片上生長，主要用于組織學，免疫組織學，冰凍切片，細胞涂片，原位雜交等。除了在實驗中的使用，實驗前的準備也十分重要，讓我們一起來看看使用前需要做哪些準備吧！用前準備：1、蓋玻片的選擇爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用細胞爬片，價格比較昂貴但是細胞貼壁牢固，拍出照片效果好；2、爬片的剪裁可根據自己的需要，到染色時再將之切開，這樣既保證了細胞均一性，又可同時做幾個指標的染色剪裁成合適大小，置于6孔板、12孔板或24孔板；3、爬片的使用前處理將剪裁好的

常用的培養基有哪幾款？2024/03/19

1、BME細胞培養基基礎Eagle培養基（BasalMediumEagle），1955年Eagle設計，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡單、便于添加，適于各種傳代細胞系和特殊研究用，在此基礎上改良的細胞培養基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細胞培養基又稱Eagle培養基（MinimalEssentialMedium），1959年在Eagle's基礎培養基（BME）上修改而來，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細胞單層生長，有可高壓滅菌品種，是一種最基本的培養

凍存管的使用注意事項2024/03/12

凍存管保存環境1、未經使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個月。2、已經接種的凍存管在-20℃保存，12個月內可有良好的菌株保存效果。3、已經接種的凍存管在-80℃保存，24個月內可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時間1、未經使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細菌純培養物中挑取新鮮培養物配成大約為3-4麥氏比濁度的菌懸液接種與菌種保存管中。2、擰緊保存管，來回顛倒4-5次使細菌乳化，不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃

酶聯免疫法是什么意思2024/03/06

酶聯免疫法全稱為酶聯免疫法吸附測定法，英文縮寫為ELISA，是一種酶標記測定方法，可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，是一種敏感性高、特異性強、重復性好的定量的實驗診斷方法。1、原理：已經被包被在聚苯乙烯板上的固相包被的抗原或抗體與過量待檢測的抗體或抗原反應，一部分結合形成固相抗原抗體復合物，另一部為多余的游離抗體或抗原，通過洗板，保留固相抗原抗體復合物，洗去多余游離抗體或抗原，再加入酶標記的抗體，形成固相抗原抗體酶標記抗體復合物，洗去多余酶標抗體，加入底物，此時酶催化底物顯色，顏色的深淺與待測

超濾離心管的使用方法2024/02/20

超濾離心管是一種采用優化過濾結構的設計方式，減少濃差極化，降低了膜易污染堵塞機率，加快了離心速度，縮短了離心所需的時間；超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理。超濾離心管具體用法：(1)選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。(2)新買來的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需

PCR八聯排管的使用方法及注意事項2024/01/31

一、使用方法：1.樣本制備：從樣品中提取DNA，確保其質量和濃度適合PCR反應。2.試劑混合：準備PCR反應體系，包括模板DNA、引物、酶和緩沖液，并混合均勻。3.充填反應管：將反應體系均勻地充填到八連管中。4.密封反應管：將塑料蓋密封到八連管上，以防止反應體系中的揮發物外泄或污染。5.放置在PCR儀中：放置八連管在PCR儀中，并按照所選程序運行PCR反應。6.PCR產物分析：根據需要對PCR產物進行分析，例如凝膠電泳、測序或定量PCR等。二、注意事項：1.防止污染：在PCR前，必須非常小心，以

96孔深孔板的適用范圍2024/01/25

①儲存樣品：可以替代常規的1.5ml離心管儲存樣品，并且儲存時擺放整潔，節省空間，儲存量大，可耐受-80℃冰箱。②處理樣品：可以結合排槍、高通量自動液體操作儀器和軟件，實現對生物樣品的高通量操作，比如沉淀蛋白，液液萃取。大大提高樣品處理的效率。PP材質更可以耐受121℃高溫高壓滅菌處理。③進樣操作：通用于各種自動進樣器，可直接放在自動進樣器的樣品倉中進樣，相比傳統的進樣小瓶，不但可以成倍樣品倉的樣品擺放數量，另外還實現了樣品在96孔板上處理后直接進樣，省去了來回吸取樣品，擺放樣品，蓋蓋子，插內插

細胞傳代培養及其操作步驟2024/01/17

原代細胞培養成功以后，需要進行分離培養，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養障礙影響細胞生長。細胞由原培養瓶內分離稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過程稱之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的最大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗。操作步驟：（1）吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。（2）向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量，以能覆蓋培養瓶底為宜。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消

細胞傳代實驗2024/01/10

所需材料：裝有75%醫用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、含血清培養基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸，以及擁有基礎設施的細胞間。操作步驟：1.紫外照射滅菌后，我們應該穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。2.從培養箱取出細胞培養瓶（一般選擇處于對數期的細胞），用酒精噴壺在培養瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉移培養瓶到超凈臺。3.打開蓋子，輕輕吸出舊的培養液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次（注意從側壁加入，以免沖掉細胞），棄去PBS緩沖液。4.可用移液器加入1-2ml胰酶（具體量根據實

PCR產品如何選擇？2024/01/04

PCR單管：在樣品量少時使用，可根據樣本數量靈活使用。管身和管蓋相連，易與微量離心管搞混，但不可混用。PCR管管壁較薄，有利于保證PCR擴增中熱傳導的速度和均勻，但也因此無法承受較大的離心力；微量離心管管壁比較厚，滿足離心要求，但也導致了傳熱慢、不均勻。PCR八連管：在樣本量增大時可選擇八連管。一般有透明和白色雙色可選擇，分別適用于普通PCR和qPCR。PCR板：PCR板在批量處理樣本時使用，適用性廣，看使用不同自動化應用。板孔邊有數字、字母編碼，便于標記和識別。有透明、彩色透明和白色款，彩色和

在PCR反應體系中添加劑DMSO的作用2023/12/27

DMSO主要用于高GC含量的模板擴增，可能的機理是改善GC含量高的DNA的變形情況，降低其二級結構，使得聚合酶在二級結構處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴增一些難擴的模板。當體系中加入DMSO時，可適當降低退火溫度。在實踐中，聚合酶鏈式反應可能因各種原因而失敗，通常表現為兩個問題，一是目的模板的擴增量太少，二是非目的基因擴增太多。這種情況研究人員通常會在反應體系中加入合適的添加劑進行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級結構或者降低非特異性的啟動。下面是幾種常用的添加劑以及它們的