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胰蛋白酶在細胞培養中發揮的作用及操作步驟2023/08/24

胰蛋白酶是細胞培養實驗中常見的一種試劑，他在細胞培養實驗中怎樣才能發揮該有的作用呢？又該如何進行實驗呢？讓我們一起來看看！作用：1.胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統中的蛋白質，它存在于胰液中。2.質膜上的蛋白質負責多種功能，這些功能對于維持細胞的正常生理活動至關重要。3.一些質膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細胞骨架蛋白連接到細胞外基質。這有助于細胞粘附和細胞遷移。4.在細胞培養物中，可以將胰蛋白酶添加到培養基中，通過消化粘附蛋白從培養皿表面釋放貼壁細胞。5.胰蛋

酵母蛋白胨的優勢及蛋白胨的用途2023/08/21

酵母蛋白胨的優勢：動植物源蛋白胨是市場中主要的蛋白胨，對于比較粗放的發酵，該類產品具有一定的優勢。但隨著酵母要求逐漸精細化、標準化后，這類蛋白胨的弊端逐漸暴露出來。動植物生長的環境及一些外在因素，可能造成動植物生長狀態的波動，進而造成其體內蛋白含量波動，并且蛋白的儲存、提取和加工體系基本是開放的，可能會造成原料品質的變化（如變色、腐敗等）和營養成分的差異，最終導致蛋白胨產品質量的不穩定，以此為原料，勢必會影響發酵生產的穩定性；動物源蛋白凍可能存在致病性和風俗禁忌問題，植物性的蛋白胨主要存在過敏性

移液槍如何校準？2023/08/18

校準步驟：1、打開電子天平，電子天平調零。2、天平稱指示穩定后，按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上，對移液器進行清洗。3、將移液器的體積調整到檢查點。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點。可以是特定的容量點。4、用移液管將檢測到容量的超純水系統轉移到天平的小量杯中。5、天平指示穩定后，立即加載并記錄電子分析天平指示的標準值。記錄的結束會使電子分析日甚至歸零。6、重復實施3-5次，記錄結束，再次將移液器的體積調整到下一個檢查點。檢查點按照從小到大的標準進行調整。

Gelred核酸凝膠染料的使用方法2023/08/16

A.預制凝膠法1.將GelRed（10,000X）原液以1:10,000比例加入到熔化的凝膠中，混合均勻。（GelRed可在加熱后的凝膠冷卻至45℃左右時添加。）2.倒膠，室溫放置等待凝固。3.按常規方法上樣電泳。4.觀察染色凝膠使用標準的透照儀(302或312nm)，成像使用溴化乙錠濾光器，SYBR或GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結果。5.未使用的含有GelRed的預制凝膠可以重新熔化做膠，為保證最佳熒光信號，酌情添加適量染料。不建議長期儲存含有GelRed熔化形式的瓊脂糖。含有

新生牛血清的成分2023/08/10

1.蛋白質新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外，主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細胞促進細胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細胞依附;轉鐵蛋白可以結合鐵離子，減少其毒性會被細胞利用的可能。2.多肽血小板促生長因子能促細胞分裂，據專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員，多肽擁有著重要的作用，比如它可以促進細胞增殖因子數量的增加。不僅如此，它還能夠促成纖維細胞生長因子以及神經細胞生長因子等。雖然從數量上來看新生牛血清的含量比例少，但它能夠促進細胞的增長。3.激素激素

蛋白免疫印跡技術的步驟，分為哪五大步？2023/08/08

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Westernblotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測，可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。基本步驟：蛋白免疫印跡技術可以分為樣品制備、電泳、轉

胰蛋白胨國產與進口的區別及特點2023/08/03

國產的的胰蛋白胨是以新鮮牛肉和牛骨經胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養基，生化制品及微生物學科研等領域中。進口的胰蛋白胨與國產的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨，都是采用酪蛋白為原料，經過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營養價值很高的磷蛋白，是生產蛋白胨常用的原料。用此原料生產的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別

如何用TRIzol提取RNA2023/08/01

試劑配制和準備1.DEPC水或RNasefree水；2.75%乙醇（現配后預冷）：用無水乙醇和DEPC水配制（DEPC水：無水乙醇=1：3），然后放4℃備用。1.5mLDEPC水+4.5mL無水乙醇；3.異丙/醇：棕色瓶；4.lv仿：棕色瓶；5.Trizol：存放于4℃。RNA抽提1.勻漿：在通風櫥中往含有組織塊的EP管中加入TRIzol和磁珠（組織100mg+1mltrizol+2顆研磨珠）。2.研磨：設置研磨時間和頻率，一般卵巢組織為65HZ，120s；隨后可以繼續實驗或者凍存在-80℃。3

塑料離心管的特點2023/07/31

實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的較多，因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管有PP（聚丙烯）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料離心管為透明或者半透明，可以直觀的看到樣品離心情況。接下來就介紹一下各種材質塑料離心管的特點：PP（聚丙烯）：半透明，化學及溫度穩定性較好，但是在低溫下會變脆，所以在離心時不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯)：透明度較好，硬度大，可以高溫消毒，但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬

ACK紅細胞裂解液的作用原理2023/07/28

紅細胞裂解液是一種去除紅細胞的方法，即用裂解液裂解紅細胞，它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法，主要用于經酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。經紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞，可進一步用于原代培養、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。紅細胞裂解液的作用原理：細胞裂解液一般都使用含酶的，在血紅細胞表面上有紅細胞專屬的表面抗原，當裂解液中可以攻擊特定紅細胞表面抗原的酶的

牛血清白蛋白（BSA）的應用2023/07/27

牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。應用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的應用，例如在WB實驗中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環境因素，如加熱、表面張力及化學因素引起的變性。測定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標準）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、

二甲基亞砜的基本用途2023/07/26

二甲基亞砜（DMSO）是一種含硫有機化合物，分子式為C2H6OS，常溫下為無色無臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。氯化鉻，氯化/*等過渡金屬鹵化物與氯化/*，氯化鈉等鹵化物在DMSO中有一定溶解度，故可以應用在有機電化學中。二甲基亞砜廣泛用作溶劑和反應試劑，特別是丙烯腈聚合反應中作加工溶劑和抽絲溶劑，作聚氨酯合成及抽絲溶劑，作聚酰胺，聚酰亞胺和聚砜樹脂的合成溶劑，以及芳烴、丁二烯抽提溶劑和合成氯氟苯胺的溶劑等。同時也可以用作乙炔、芳烴、二氧化硫及其他氣體的溶劑以及腈綸纖維紡絲溶劑。是一種即溶

冰凍切片的制作步驟以及每個步驟的要求和作用？2023/07/24

冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用于手術中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內的溫度一般設置為-18℃至-25℃，根據不同組織調節不同腔溫，平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態。1、當冰凍組織提取好之后，在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替)，放上組織，速凍。2、待組織凍結后，將冷凍頭裝刀切片機上。3、粗切，修出切面細切幾張，用毛筆刷去刀上組織片

如何挑選凍存管2023/07/21

材質一般凍存管都是由無細胞毒性的材料制備的，實驗室常用的材質有塑料和玻璃。但因為玻璃材質的凍存管不能用在高速或者超速離心機上，所以塑料材質的凍存管用的比較多。聚丙烯的化學和溫度穩定性非常好，液氮的氣體狀態環境下，可耐低溫至零下187℃。除此之外，如果對樣品安全性要求比較高，可以選擇非致突變原料和無熱原的VID兼容管。并且注意使用前不要打開，如果已經打開，那使用前一定一定要滅菌！構成凍存管一般都由管帽、管體構成，分為內旋蓋和外旋蓋凍存管。如果樣本要液氮氣相中保存，就用內旋凍存管，帶硅膠墊的；如果樣

擴增產物出現多條帶，原因是什么？2023/07/20

1)引物用量偏大，引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。2)循環的次數過多。適當增加模板的量，減少循環次數。3)酶的用量偏高或酶的質量不好。應降低酶量或調換另一來源的酶。4)退火溫度偏低，退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度，減少變性與延伸時間，也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優化退火溫度。5)樣品處理不當。6)Mg2+濃度偏高。因適當調整Mg2+使用濃度。7)若為PCR試劑盒。也可能時試劑盒本身質量有問題。8)復制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發生。冰

你真的了解胎牛血清嗎？2023/07/18

胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必需的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質

PCR實驗原理2023/07/14

原理：PCR利用DNA聚合酶的催化作用，在高溫下依次完成DNA的變性、引物結合和DNA合成等反應，從而使DNA序列得到擴增。PCR的核心是引物，其能夠與目標DNA序列的特定區域互補配對，使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側的DNA分子，從而擴增出目標DNA序列。操作過程：1.DNA模板的制備：將目標DNA提取出來，使其成為PCR反應的模板。2.引物的設計：根據目標DNA的序列設計引物，以便在PCR反應中能夠引導DNA擴增。3.PCR管中的混合溶液制備：將模板DNA、引物和PCR反應所需的其他

酶活性測定常見方法2023/07/12

（1）定時法：（兩點法）通過測定酶反應開始后某一時間段內（t1到t2）產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強酸、強堿、蛋白醫學教育網整理沉淀劑等，使反應停止（也叫中止反應法）。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產物的變化。該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或物的變化。優點：簡單易行，對試劑要求不高。缺點：難保證測定結果的真實性。難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。隨著保溫時間的延續，酶變性失活加

胎牛血清的幾項技術指標你知道嗎？2023/07/07

一、內毒素內毒素是革蘭氏陰性菌的細胞壁外壁層上的成分。當細菌死亡自溶或粘附在其它細胞時，才表現其毒性。內毒素直接參與細胞凋亡，血清中內毒素含量越低，對細胞毒性越小，越利于細胞的生長和傳代；內毒素含量過高，會直接導致細胞提前老化。國際上規定，胎牛血清的級別，應以內毒素水平的高低來確定，其中，特級胎牛血清的內毒素應二、血紅蛋白含量胎牛血清的顏色會根據血紅蛋白含量的不同表現出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細胞培養用血清的標準是血紅蛋白含量不高于20mg/dl，顏色越紅，數值越高；反之，數值越低。實際

細胞實驗注意事項2023/07/06

1、細胞復蘇將細胞凍存管從干冰中取出，立即放置37°水浴速融1min，見無冰晶即可不再水浴（用鑷子拿取）將細胞凍存液加入10~15ml完培中，吹打混勻，減少DMSO對細胞毒性，800rpm離心5min棄上清，細胞沉淀進行下一步傳代。2、細胞傳代試劑與材料（貼壁細胞）：細胞：4T1乳腺癌細胞；基礎培養基：1640培養基（含有生物素、維生素B12、對氨基苯甲酸PABA、高濃度的維生素肌醇和膽堿；不含有蛋白質、脂質或生長因子）；血清：胎牛血清FBS（細胞營養液：提供基本營養物質、提供激素和各種生長因子