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上海鹿森生物工程有限公司
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透析袋的用處有多大?2024/10/10
透析袋是用半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。新透析袋可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的多的還是用纖維素制成的透析膜,截留分子量MWCO(即留在透析袋內的生物大分子的小分子量)。截留分子量越大也就是說透過性
緩沖液的原理2024/09/29
由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用,是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當向這種溶液中加入一定量的強酸時,H+離子基本上被A-離子消耗:所以溶液的pH值幾乎不變;當加入一定量強堿時,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。在緩沖溶液中加入少量強酸或強堿,其溶液pH值變化不大,但若加入酸,堿的量多時,緩沖溶液就失去了它的緩沖作用。這說明它的緩沖能力是有一定限度的。緩沖溶液的緩沖能力與組成緩沖溶液的組分濃度有關。0.1mol·L-1HAc和0.1mol·L-1NaAc
重組蛋白可分為哪幾種2024/09/24
重組蛋白的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。體外重組蛋白的生產主要包括四大系統:原核蛋白表達,哺乳動物細胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。生產的蛋白在活性和應用方法方面均有所不同。根據自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統,提高表達成功率。按功能分,可分為以下幾種:1.白細胞介素(Interleukin,IL)由多種細胞產生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于最初是由白細胞產生且又在白細胞間發揮作用,所以得名,現仍沿用此名。2.干擾素(interferon,IFN
細胞爬片的準備及操作方法2024/09/12
胞爬片就是讓玻片浸在細胞培養基內,細胞在玻片上生長。主要用于組織學,免疫組織,冰凍切片,細胞涂片,原位雜交等。細胞爬片的準備1.蓋玻片的選擇:爬片可用一般的蓋玻片,也可用專用細胞爬片(價格比較昂貴)但是細胞貼壁牢固,拍出照片效果好;2.爬片的剪裁:可根據自己的需要,到染色時再將之切開,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做幾個指標的染色剪裁成合適大小,置于6孔板、12孔板或24孔板;3.爬片的使用前處理:將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時,
如何用PBS清洗細胞?2024/09/09
一:取材撕取洋蔥鱗莖內表皮2~3mm2置于載玻片上,用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴,使材料充分浸入到液體中,處理約5分鐘。(撕取的材料大小適中,且為內表皮)二:去垢處理用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液,加2~3滴37°C預溫的去垢劑1%TritonX-100,使液體充分浸泡材料,并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。(吸水紙不要直接在材料上面吸,以免帶丟材料,去垢處理過程中不要讓材料干燥)三:沖洗吸去1%Triton,用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗,反復兩至三次。四:固定用吸水紙吸盡
細胞培育所需求的基本條件有哪幾個?2024/08/27
1.溫度細胞溫度過低時細胞成長緩慢甚至不成長。利用冷凍保藏細胞可保持細胞的原有割裂分解能力。溫度過高導致細胞。這主要是由酶和蛋白質所需求的適溫度決定的。大都生物大分子遇到高溫后簡單導致空間結構改動或者喪失(變性)。細胞膜遇到高溫后簡單變化。2.pH過酸或過堿可導致細胞。這主要與蛋白質的變性和細胞膜的結構受損有關。3.透壓細胞內外可溶于水的物質份額和品種決定細胞的脹大與收縮程度,因為細胞膜是半透膜,只允許對自己有利的物質經過。4.細胞養物養分物和水一同,又名細胞培育液,培育液中含有細胞增殖和成長所
siRNA轉染操作及要點2024/08/20
siRNA(小干擾RNA)是一種新型的基因治療工具,是由21-25個核苷酸組成的雙鏈短RNA分子,能夠特異性地誘導靶基因的沉默,進而抑制蛋白的表達。siRNA最初由AndrewFire和CraigMelo在1998年提出,之后在2001年被證明可以特異性地抑制哺乳動物細胞中的靶基因表達。siRNA的抑制作用是通過其與AGO蛋白組裝成的RNA誘導沉默復合體(RISC)發揮的。一條鏈被降解,另一條鏈則與靶基因的mRNA互補配對,使其被切割降解,從而達到治療相關疾病的目的。與傳統的基因治療相比,siR
移液槍的原理是什么?2024/08/13
移液器其實就是一個加了彈簧和活塞位置調節機構的針筒。至于你問為什么那么精確,其實微量注射器(微量進樣器)也很準,只不過不能像移液器一樣標準化使用操作。移液器確保反復使用的要素,主要和密封性有關。任何廠牌的移液器,最后其實都是首先拼密封性,其次是調節機構的準確性。密封良好的移液器,只要調節機構經過校準并且可以穩定保持精度,就不必擔心有問題。移液器的密封性主要有幾個因素:1)活塞的品質活塞的材質很重要,要經得起長期與套筒相互摩擦2)套筒的品質不能容易彎曲變形或熱脹冷縮3)O型彈性密封圈這個是耗材,一
DNA提取試劑盒有哪幾種?2024/08/05
DNA提取試劑盒是根據氯/化*法構建的,能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化/*具有能將含有纖維素等的細胞壁中的羥基芐基化,從而破壞細胞壁的特性。本制品利用了氯化*的這一特性,將植物樣品凍結融解后,再使用PipetTip將植物樣品在Microtube壁上數次按壓即可破壞細胞壁。本法與傳統方法相比,省去了液氮研磨等煩瑣步驟,有利于一次性處理大量樣品。而且,本制品經過了改良,熱處理時間只需15分鐘,使用本制品從實驗開始至水相回收只需30分鐘時間。得到的基因組DNA可以進行PCR擴增及限制酶處理
針式過濾器的優勢2024/07/30
優勢更大的表面積:針頭過濾器通常設計有較大的表面積,這有助于增加流速和過濾量。更大的表面積不僅提升了過濾效率,還使得過濾過程變得更加容易,因為它降低了排空注射器所需的壓力。高外殼壓力:部分針頭過濾器的最大外殼壓力可達10.5bar,這意味著可以在更高的壓力下進行過濾,從而進一步提高流速。操作簡便結構緊湊:針頭過濾器結構緊湊,易于安裝和拆卸,使用起來非常方便。這種設計特別適用于實驗室環境,方便研究人員快速完成樣品過濾。顏色代碼:許多針頭過濾器的外殼上配有顏色外圈條,用于清楚地標明內部濾膜的類型,便
包埋劑的操作步驟有哪些?2024/07/24
操作步驟1、冰凍制片組織常規取材。2、取材后的組織材塊用干擦布或吸水紙充分吸干表面水分。3、在冷凍切片機里預冷的組織托上滴加冷凍切片組織包埋劑。4、待包埋劑底部變白后放上組織材塊。5、迅速放上冷凍錘(低于-25℃),待組織與包埋劑冷凍凝固后取下冷凍錘。6、將組織托夾入切片夾頭,進行切片。7、切片完成后可將組織托置于室溫下3-5分鐘解凍后變軟,用水將包埋劑沖洗干凈。8、將組織放入包埋盒,浸入中性緩沖福爾馬林固定液中進行組織固定。結果1、包埋效果良好:包埋劑均勻圍繞組織,冷凍后包埋劑和組織變白,硬度
如何選擇細胞培養板2024/07/17
培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384孔等。平底和圓底(U型和V型)培養板區別和選擇不同形狀的培養板有不同用途。培養細胞,通常是選用平底的,這樣便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養液面高度相對一致。因此做MTT等實驗時,無論是貼壁和懸浮細胞,一般選用平底板。測吸光值一定要使用平底的培養板。要特別注意材質,標示“TissueCulture(TC)Treated”是養細胞用的。U型或V型板,一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面,當做兩種不同淋巴細胞混合培養時,需要二者相互接觸刺激,
免疫熒光染色步驟和原理2024/07/15
免疫熒光染色是一種常用的細胞和組織學研究技術,它利用特異性抗體與標記熒光染料結合,來檢測和定位細胞中的特定蛋白質或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理:步驟:細胞或組織樣品的固定:通常使用甲醛或乙醛來固定細胞或組織,以保持其形態和蛋白質結構的完整性。抗體的孵育:將特異性抗體加入到樣品中,與目標蛋白質結合。洗滌:用緩沖液洗去未結合的抗體。二抗的孵育:加入熒光標記的二抗,與原抗體結合。洗滌:用緩沖液洗去未結合的二抗。熒光顯微鏡觀察:使用熒光顯微鏡觀察樣品,熒光信號可顯示目標蛋白質的位置和分布。原
養好的細胞如何凍存?2024/07/11
在不附加任何保護劑下直接凍存細胞時,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在﹣130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞凍存時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,待復蘇時重新進入生長分裂周期。實驗開始前,將凍存管、15毫升離心管、移液管、移液槍、槍頭等放入無菌超凈工作臺,以紫外線照射30分鐘。采用通風機通風3分鐘。以
牛血清白蛋白的主要作用2024/07/09
牛血清白蛋白,英文名稱是BovineSerumAlbumin(BSA),也可稱為CohnFractionV,即第五組分。牛血清白蛋白作為牛血清中的一種白蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.43kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白有著廣泛的實驗室應用,除在細胞培養中作為營養物添加外,牛血清白蛋白主要還有以下用途:1.在酶切反應體系中作穩定劑,對酶起保護作用,并防止其分解和非特異性吸附。2.維持滲透壓、提供pH緩沖、起載體作用。3.作為蛋白定量檢測的標準品使用。4.常規免疫實驗中作封閉試劑使
木聚糖酶活性測定方法分享2024/07/03
木聚糖是一種存在于植物細胞壁中的多糖類物質,是植物半纖維素的主要成分。木聚糖酶分布廣泛,可以從動物、植物及微生物體內獲得。檢測原理:木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖,具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下,能夠和DNS試劑發生顯色反應。通過反應溶液的顏色的變化,來確定還原糖的含量。因為還原糖的生成量和反應液的木聚糖活力是成正比的,通過分光光度法可以測定,計算出樣品中的木聚糖酶活力。檢測所用的試劑:乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。
N2添加劑的使用方法2024/07/01
N2添加劑基于Bottenstein'sN-1配方,是一種化學成分確定的無血清添加劑。推薦用于支持源自外周神經系統和中樞神經系統和原代神經母細胞瘤及有絲分裂后神元經的生產和表達。N2添加劑作為100X濃縮液提供,可與補充生長因子(如bFGF和EGF)后的Neurobasal培養基配合使用。它也可以與DMEM配合使用。使用方法:N2細胞培養添加劑是100X濃度。用前請用基礎培養基(如Neurobasal)稀釋到1X。如準備100ml培養基:將1ml的N2細胞培養添加劑(100X)加入到99ml的基
細胞培養板和酶標板的區別2024/06/21
什么是酶標板,它是一種配合在酶標儀上,用來做酶聯免疫實驗的器材。雖然它看上去只是一塊普通的有孔的塑料板,但是在酶免疫測定中卻是一個的部分。酶聯免疫吸附實驗,簡稱ELISA,是酶免疫測定技術中應用的技術。其基本方法是將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面,并保持其免疫活性。然后抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形
馬血清在細胞生物學中的作用2024/06/14
馬血清是采用健康馬血液為原料,經無菌采集、分離、微孔過濾后而成,性狀為澄清液體,無噬菌體、低內毒素,無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等,促細胞生長繁殖效果好,在細胞實驗中是常用的試劑。以下是馬血清在細胞生物學中的作用:1、馬血清可用于細胞培養或誘導樹突狀細胞,且細胞生長、增殖狀況良好。有研究人員分別用胎牛血清和馬血清培養馬單核細胞來產生樹突狀細胞(eqMoDC),結果發現,馬血清馬血清生成的eqMoDC與FBS生成的eqMoDC沒有區別。然而,與馬血清補充培養基一起孵育的eqMoDC在從
干型透析袋的處理和儲存2024/06/11
透析袋的處理:1、根據需要,把透析管剪截成適當長度(10-20cm)。2、在大體積的2%碳酸氫納和1mmol/LEDTA(pH8.0)中將透析管煮沸10分鐘。3、用蒸餾水清洗。4、于EDTA(1mmol/L,pH8.0)中煮沸10分鐘。5、或將透析管置盛有蒸餾水的燒杯內,高壓蒸汽滅菌10分鐘。6、冷卻后,存放于4°C。透析管必須確保始終浸于溶液中。7、從此時起取用透析管時總須戴手套。8、用前將透析管用蒸餾水清洗干凈后即可使用。儲存條件1、透析袋可存放于10-29度。2、每次使用后將余下的膜放回袋
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