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解決PCR產物中出現假陰性或無擴增產物2022/05/23

解決PCR產物中出現假陰性或無擴增產物（即陽性對照中有條帶，而樣品則無條帶）方法：1、條帶放置時間過久,核酸被降解，最好在48h內進行電泳檢測。2、DNA模板純度低，如含有雜蛋白質或Taq酶抑制劑，可對DNA進行再次純化或重新用優質試劑盒提取DNA;DNA濃度太低時，可以加大模板量；對具有二級結構DNA使用較好的聚合酶；提取DNA時，避免吸入酚類試劑。3、對設計不合理的引物進行重新設計合成；引物應高濃度小量分裝保存，防止多次凍融而降解失效；檢測引物OD值并進行電泳檢測以確保兩條引物濃度一致。4、

了解細胞系用途2022/05/18

細胞系指原代細胞培養物經首ci傳代成功后所繁殖的細胞群體，也指可長期連續傳代的培養細胞。現在細胞系廣泛的應用于科學研究和藥物，用途包括：1、科學研究：藥物研究開發與基礎研究藥物研究與開發（1）新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。（2）疫苗研究與開發：如病毒性疫苗的研究與開發（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。（3）基因工程藥物研究與開發：如干擾素研究與開發，細胞生長因子研究與開發等。（4）細胞工程藥物研究與開發：生物活性多肽研究與開發，人參皂甙、紫杉醇

簡述大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南2022/05/09

大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南：1．試劑盒從冷藏箱里取出后放在常溫環境下15-30分鐘后再使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可以放在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。3．每一步步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間*控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，*做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)

ELISA試劑盒使用技巧大集合2022/05/05

ELISA試劑盒使用技巧大集合：1.洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。2.吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。3.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。4.為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。5.未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用

原代細胞培養實驗步驟2022/04/24

原代細胞培養實驗步驟：1、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。2、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中，去除小腦和間腦。3、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養皿中。4、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。5、大腦皮質放于DMEM中(含慶大霉素和谷氨酰胺)，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05

活性蛋白試劑盒提取操作步驟2022/04/19

本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養細胞中提取具有活性的全蛋白，用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液LysisBuffer勻漿裂解組織或細胞，作用溫和，提取過程簡便。獲得的全蛋白可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶的活性的測定的等后續研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。應用方面：可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶活性測定等后續研究。操作步驟Ⅰ、實體組織蛋白的提取1、在每mL冷LysisBuffer加入10μL磷酸酶抑制劑，1μ

支原體污染細胞常用清除方法2022/04/13

支原體污染細胞后，有必要清除支原體，常用方法有：1、對于非重要的細胞，如培養中的細胞、WCB的細胞等，將培養物與用過的培養基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞，如來源珍貴或實驗室中細胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2、用MRA處理：用支原體清除劑（MycoplasmaRemovalAgent）處理細胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清除支原體。3、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細胞營養馴化→優質細胞群的篩選→細胞清洗→反復離心洗滌，其原理是利用離心力、細胞、微生物質量和懸

PCR產物跑不出來條帶原因參考2022/03/23

PCR是分子生物學的常規和常用手段，用途很多，但是都是通過擴增目的基因片段來實現的。那么，首先需要搞明白的是，需要擴增的基因片段大小是多大，因為不同大小的基因片段其擴增的難度是有差異的，尤其過長的片段，需要使用不同的taq酶來進行擴增（比如LAtaq）。幾點容易發生問題的地方供參考：1.引物，PCR是基于引物來實現的。引物是否是自己設計的？如果是，需要檢查一下引物設計的是否合理。如果是從文獻中選取的，一般出問題的可能性不大，不放心的可以在數據庫比對一下，防止文獻出錯。2.模板，一般來講通過試劑盒

細胞因子一般具有的特點2022/03/15

細胞因子(cytokine，CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導多種細胞產生的低分子量可溶性蛋白質，具有調節固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子等。眾多的細胞因子有以下共同的作用特點：1、絕大多數細胞因子為質量小于25kDa的糖蛋白，質量低者如IL-8僅8kDa。多數細胞因子以單體形式存在，少數細胞因子如IL-5、IL-12、M-CSF和TGF-β等以雙體

血清白蛋白主要有兩方面作用2022/03/07

雞血清蛋白（ChickenSerumAlbumin）是雞血清中的一種球蛋白，也是血清的主要成分.血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養作用.在動物細胞無血清培養中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。無血清培養基(serumfreemedium,SFM)，是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎培養基加少量血清所配制的*培養基可以滿足大部分細胞培養的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種

關于實驗室化學試劑使用說明2022/03/07

國內實驗室一般將化學試劑分為四個等級：一級試劑（優級純試劑）通常用G.R表示。二級試劑（分析純試劑）通常用A.R表示。三級試劑（化學純）通常用C.P表示。四級試劑（實驗或工業試劑）通常用L.R表示。此外，根據特殊的工作目的，還有一些特殊的純度標準。例如光譜純、螢光純、半導體純等。取用時應按不同的實驗要求選用不同規格的試劑。例如一般無機實驗用三級或四級試劑即可，分析實驗則需取用純度較高的二級甚至一級試劑。科研強則中國強！上海撫生生物秉承“做陽光下的企業，做陽光下的人”的核心價值觀和“誠信、創新、奮

細胞進行爬片流程及注意事項2022/03/01

在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測（TUNEL）時，免不了要制備細胞爬片，爬片質量*決定了最后拍照的質量以及實驗數據的精準性。現就如何制備好的細胞爬片介紹。細胞進行爬片操作流程：1.胰酶消化細胞后計數重懸細胞于*培養基中（懸浮細胞直接離心）。2.加細胞時，根據玻片的大小，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養基，目的是使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。3.根據自己的需要選擇合適的細胞密

抗體形成的具體規律2022/02/22

具體如下：1、初次反應：抗原進人機體后，須經過一段潛伏期（誘導期）才產生抗體。潛伏期的長短與抗原性質、數量以及機體狀態等有關。接種滅活疫苗，一般經5~7天血液中可出現抗體。出現最早的是IgM，但它消失也較快，在血液中只能維持數周或數月。所以在傳染病的早期，測定特異性IgM有診斷價值。稍后出現IgG，當IgM接近消失時，正是IgG達到高峰的時期。它在血液中維持的時間較長可達數年以上。IgA出現最晚，常在IgM和IgG出現后2周~2個月才能從血液中測出，含量最少，但維持時間較長。2、再次反應：再次受

細胞角蛋白7抗體穩定性良好的主要原因2022/02/15

細胞角蛋白7抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩定性。之所以具有這樣良好的穩定性，主要原因有四個方面：1.抗體濃度高濃度的抗體產品可減少容器表面吸附造成的物質損失。撫生抗體產品中，93%的濃度大于0.5mg/ml。抗體產品濃度普遍大于業內水平。2、抗體分子的高Tm值有數據表明，在70℃時抗體分子才開始明顯地去折疊（unfold），而這一過程之前的變化也具有相當的可逆性。也就是說，在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60度，抗體分子都能維持正確折疊，保持應有的活性。3.抗體純度高純

穩定細胞株篩選的主要三類方法2022/01/27

主要有三類方法：1、單克隆環法：此類方法多用于整合率低的轉染方法或者需要得到單克隆細胞株的實驗。其優點在于工作量小，只需將轉染或者病毒載體感染后的細胞按照一定的細胞密度轉移至新皿中，并使用合適的藥物進行篩選，最后在克隆環的幫助下對單克隆細胞株進行挑選，并在新皿中完成擴增。缺點在于需要對細胞密度和藥物濃度繪制致死曲線并選取合適的細胞密度和藥物濃度進行篩選，一些細小的密度和濃度差別都會導致難以獲取均一的單克隆，結果導致獲取的克隆不純，含有非整合的細胞。穩定整合的細胞在這樣一類混合細胞中，很快會失去生

總結RM細胞培養的優點2022/01/05

細胞培養是指將細胞從動物或植物體內取出，然后在適宜的人工環境中生長的過程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。RM細胞培養的優點有一下幾點：1.研究的對象是活細胞在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條

有關PCR反應污染幾個原因2021/12/22

PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、標本間交叉污染標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染.二、PCR試劑的污染主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.三、PCR擴增產物

歸納化學試劑發生變化的原因2021/12/15

化學試劑在貯存過程中是否會發生變質，取決于內外兩個方面的因素，內因是試劑本身化學結構所決定的理化性質；外因則是試劑所處的環境條件。要做到合理保管，一要了解試劑結構與性質間關系，二要創造適應試劑貯存的外部環境。化學試劑變質的原因：環境主要是指貯存的溫度、光照和介質。介質一般是指空氣和混有的雜質。貯存室里除空氣中含有的氧、二氧化碳和水蒸氣以外，還往往含有存放的各種揮發性試劑擴散到空氣中的蒸氣，常見的有氯化氫、硝酸、硫化氫、二氧化硫、溴、dian、乙烯、甲醛等蒸氣；另外還有飄混在空氣中的塵埃，其中有無

ELISA試驗檢測結果應具備的三條件2021/12/09

1、標本因素血清標本可按常規方法采集，應留意避免溶血，紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，嚴格遵照劃定操縱，必能得出正確的結果。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產氣憤泡。有此測定需用稀的血清，可在

了解進行細胞系鑒定必要性2021/11/29

1.什么是細胞系鑒定？所謂細胞系鑒定即通過STR（短串聯重復）圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后，細胞系可以通過定期的檢測，以防止出現細胞系被誤認或交叉污染的情況。2.為什么要進行細胞系鑒定？首先進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫藥的研究都采用培養細胞來進行，這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來。據估計，15-20%的實驗室，實驗中所使用的細胞已經不是原來的細胞系，或者與其