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影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果必看事項(xiàng)清點(diǎn)2023/05/05: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研領(lǐng)域上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。影響ELISA試驗(yàn)結(jié)果必看事項(xiàng)清點(diǎn)：1、操作應(yīng)對(duì)試驗(yàn)的物理參數(shù)有充沛的了解，如環(huán)境溫度(保持在18c～25℃)、反響孵育溫度和孵育時(shí)刻、洗刷的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。2.正確運(yùn)用加樣器加樣器應(yīng)筆直參加標(biāo)本或試劑，ELISA試劑盒防止刮擦包被板底部。加樣過程中防止液體外濺，血清殘留在反響孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，

ELISA檢測結(jié)果解讀2023/04/23: ELISA檢測結(jié)果可以定量、定性或半定量地解釋。在定量檢測中，使用已知標(biāo)準(zhǔn)的連續(xù)稀釋液來生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，通常是光密度（OD）與濃度的關(guān)系。由此，可以計(jì)算出未知樣品中目標(biāo)物的精確數(shù)量。標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算和ELISA實(shí)驗(yàn)中未知物目標(biāo)濃度測定示例在定性檢測中，通常仍會(huì)通過使用酶標(biāo)儀來收集數(shù)據(jù)，但結(jié)果將通過與沒有標(biāo)準(zhǔn)曲線的空白和/或陰性孔的比較來解釋為陽性或陰性。半定量檢測也是在不使用連續(xù)稀釋或標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下收集數(shù)據(jù)。然而，包含陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)，通常是高陽性和低陽性，有利于相對(duì)比較未知樣本井和已知狀態(tài)的樣本孔之

ELISA吸光度值衰減探究2023/04/20: 在做elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,ELISA吸光值一直在衰減這樣的現(xiàn)象。在加完顯色液(購買)顯色一定時(shí)間后，再加終止液（2MH2SO4，自己配制）后，立即測試其吸光度值，等過幾分鐘再測試吸光度值，發(fā)現(xiàn)兩次測得的吸光度值發(fā)生衰減。第二次均小于次。并且，加終止液時(shí)，從條加到第12條后，測試發(fā)現(xiàn)，吸光度值從1-12條逐級(jí)衰減。前提是這12條酶標(biāo)板都是同一種產(chǎn)品，并且包被相同蛋白。原來ELISA吸光度值衰減可以這樣巧妙應(yīng)對(duì)。其實(shí)具體的原因也很簡單，有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好。一般情況下，終止反應(yīng)后OD值的

ELISA試劑盒包被用抗原與抗體概述2023/04/10: 一、ELISA試劑盒包被用抗原用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動(dòng)物組織、微生物培養(yǎng)物等，須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細(xì)菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提?。?。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點(diǎn)是除工程菌成份外，其他雜質(zhì)少，而且無傳染性，但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)

五種類型的生化試劑盒簡介及意義2023/03/20: 五種類型的生化試劑盒：多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒（比色法），血鉀（K?）、甘油三酯（TG）、游離膽固醇（FC）、總膽固醇（TC）檢測試劑盒（比色法）。1.多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒（比色法）：多酚氧化酶（PPO）能夠催化Catechol產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收，測定525nm光吸收增加的速率進(jìn)而計(jì)算多酚氧化酶（PPO）活性。該試劑盒適用的樣本范圍廣泛包括血清、血漿、組織、細(xì)胞、細(xì)菌；而且細(xì)致優(yōu)化了樣本處理方法、實(shí)驗(yàn)操作流程以及結(jié)果計(jì)算過程。2.血鉀（K?）檢測試劑盒（

PCR技術(shù)溫度與時(shí)間的把控解說2023/03/13: 溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長度為100～300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性)。1、變性溫度與時(shí)間：變性溫度低，解鏈不wan全是導(dǎo)致P

實(shí)驗(yàn)選擇合適的抗體要點(diǎn)指南2023/03/06: 實(shí)驗(yàn)室科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那科研實(shí)驗(yàn)室如何選擇合適的抗體呢？一.一抗選擇要點(diǎn):1）.確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型。Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說明書列出的已驗(yàn)證的類型來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。3）.確定實(shí)驗(yàn)樣本

抗原決定簇根據(jù)結(jié)構(gòu)分類2023/02/28: 根據(jù)結(jié)構(gòu)，可以把表位分為構(gòu)象決定簇、線性決定簇及新抗原決定簇1、構(gòu)象決定簇在蛋白質(zhì)分子折疊時(shí)，由線性氨基酸序列的相隔離的氨基酸殘基而形成的空間構(gòu)象，稱為構(gòu)象決定簇（conformationaldeterminant）。如溶菌酶分子上的表位來自一級(jí)序列的兩個(gè)相隔離的氨基酸殘基，所以蛋白質(zhì)或者肽類抗原的抗原決定簇依賴于其一級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)。2、線性決定簇蛋白質(zhì)抗原上的表位是由相鄰連續(xù)的或非連續(xù)的氨基酸序列形成的局部表面結(jié)構(gòu)。在共價(jià)序列的鄰近氨基酸殘基形成的表位稱為線性決定簇（lineardeterm

小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹2023/02/20: 試劑盒是用于盛放檢測化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。下面小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹：1、預(yù)包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化96T2、酶標(biāo)記抗體:(30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化0.4mLx13、標(biāo)準(zhǔn)品:重組小鼠白介素-60.5mLx24、EIA緩沖液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS30mLx15、標(biāo)記抗體稀釋液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS12mLx16、顯色劑:TMB底物液15mLx17、終止液:1N硫酸12mLx

探討小鼠ELISA試劑盒加樣問題2023/02/15: ELISA試劑盒加樣時(shí)可能遇到的問題：1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))。2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間。3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。ELISA試劑盒相應(yīng)解決辦法：1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘。2、標(biāo)本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘。3、若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-2

單克隆化抗體特性優(yōu)勢(shì)2023/02/10: 一、單克隆抗體的特性1.高度特異性。2.高度的均一性和可重復(fù)性。3.弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)。4.對(duì)環(huán)境敏感性單克隆抗體越純，對(duì)溫度越敏感，對(duì)pH越敏感。低濃度的NaCl對(duì)單克隆抗體有一定的保護(hù)作用。二、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性1.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)(1)可以用相對(duì)不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(2)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。(3)由于可能得到“無xian量”的均一性抗體，所以適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法，如IRMA

引起ELISA測定錯(cuò)誤結(jié)果的主要原因2023/01/29: 做elisa實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問題?實(shí)驗(yàn)室需要做elisa實(shí)驗(yàn),在做的時(shí)候需要特別注意些什么問題呢?這是新手朋友都有疑惑的地方。Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實(shí)驗(yàn)過程中,也需要注意很多問題.對(duì)此,你需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取得較好的實(shí)驗(yàn)成果。Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定.在Elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中

ELISA試劑盒的使用標(biāo)準(zhǔn)分享2023/01/16: ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用

ELISA試劑盒溫度把控2023/01/09: 在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)ding峰。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃

ELISA間接法和夾心法定性測定計(jì)算方法2023/01/05: 這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中，正常人血清反應(yīng)后?？沙霈F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對(duì)照（P）、和陰性對(duì)照（N）的吸光值，然后進(jìn)行

分享菌種常用的兩種保存方法2022/12/13: 菌種用于發(fā)酵過程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存。一、低溫存法：1.簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1~2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空

盤點(diǎn)ELISA測定操作技術(shù)要求2022/11/25: ELISA即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，下面盤點(diǎn)ELISA測定操作技術(shù)要求如下：1、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。2、檢測前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時(shí)觀察濃縮洗滌液中有無結(jié)晶，若有結(jié)晶應(yīng)放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB時(shí)應(yīng)注意有無顏色變化，若已顯色則可能過期或變質(zhì)，也不可使用。3、加樣后及時(shí)放入孵育箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按照說明書步

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)要素分析2022/11/14: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：逆轉(zhuǎn)錄過程1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個(gè)T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對(duì)，可合成全長的cDNA，但僅擴(kuò)增有polyA尾的mRNA，對(duì)模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實(shí)驗(yàn)。而RandomPrimers

影響抗原抗體反應(yīng)因素條件2022/11/07: 抗原抗體反應(yīng)原理：抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性?？乖瓫Q定簇=表位。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸。抗原抗體反應(yīng)的四大特點(diǎn)：特異性、可逆性、比例性、階段性。影響抗原抗體反應(yīng)因素條件:1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3～5和pH5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使他們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應(yīng)中，

敘述細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染源2022/11/01: 細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培

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