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dànbáizhì組學作為生命科學領域的重要分支,致力于全面解析細胞、組織或機體中dànbáizhì的表達、修飾與相互作用。定量dànbáizhì組學則進一步推動了生物醫學、藥物開發及疾病機制研究的發展。其中,液相色譜-質譜聯用技術(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS/MS)因其高靈敏度、高通量與廣譜覆蓋能力,已成為定量dànbáizhì組學研究的核心工具。
一、液相色譜-質譜聯用技術概述
1、液相色譜(LC)
液相色譜主要負責對復雜樣品中的肽段進行分離。常用的反相液相色譜(RP-LC)以肽段的疏水性差異為依據,在C18色譜柱中實現高效分級,極大地減少了下游質譜分析的樣品復雜度。
2、質譜(MS/MS)
質譜儀通過電噴霧電離(ESI)將肽段離子化,再通過串聯質譜(MS/MS)模式進行定性與定量分析。一級質譜(MS1)檢測肽段的質荷比(m/z),二級質譜(MS2)則對選定母離子進行碎裂,生成特征子離子譜圖,進而實現肽段與dànbáizhì的鑒定。
3、聯用技術優勢
LC與MS的聯用極大地提升了分析的分辨率和靈敏度,能夠覆蓋動態范圍廣、豐度跨度大的dànbáizhì群體,實現從復雜生物樣本中高效、準確地提取有價值信息。
二、LC-MS/MS在定量dànbáizhì組學中的應用
1、標記定量方法
(1)iTRAQ與TMT標記
等量標記方法如iTRAQ和TMT(Tandem Mass Tags)廣泛應用于多樣本并行定量。這類方法通過同位素標簽對肽段進行化學標記,在質譜MS/MS級別實現相對定量,具有高通量、jīngquè度高的優勢,特別適合大規模臨床樣本研究。
(2)SILAC標記
穩定同位素標記細胞培養(SILAC)通過在細胞培養中引入輕重同位素氨基酸實現天然代謝標記,避免樣品處理過程引入的偏差。SILAC特別適合細胞內動態變化研究,如藥物刺激、信號通路調控等。
2、無標記定量方法(Label-Free Quantification, LFQ)
LFQ方法基于肽段離子信號強度或譜圖計數進行定量,適用于探索性研究或大規模篩選項目。近年來,結合高靈敏度質譜平臺和優良數據處理軟件(如MaxQuant、Spectronaut),LFQ已能實現數千種dànbáizhì的高精度定量,在腫瘤標志物發現、免疫研究中展現出jígāo價值。
3、DIA模式的興起
數據獨立采集(DIA)技術通過系統性、無偏倚地采集全部肽段信號,極大提高了數據的重現性和準確性。SWATH-MS、BoxCar DIA、PASEF-DIA等新興技術,使得DIA模式在復雜樣本如組織、血漿、外泌體蛋白組學中獲得廣泛應用。
4、定量dànbáizhì組學在多組學整合中的角色
隨著多組學(Multi-Omics)研究的發展,將定量dànbáizhì組學數據與轉錄組、代謝組、表觀組學整合,成為解析復雜疾病機制的重要手段。LC-MS/MS生成的高質量定量數據為通路分析、網絡構建和系統生物學研究提供了堅實支撐。
三、技術進展助力定量dànbáizhì組學發展
高分辨率質譜儀提升了蛋白鑒定深度和定量準確性。
納升級液相色譜(nanoLC)拓展了微量樣本(如單細胞)的定量能力。
高pH反相色譜分級與多維分離技術,顯著提高了dànbáizhì組覆蓋度。
AI輔助譜圖預測與識別(如Prosit、DeepMass),進一步提升了數據處理效率和準確性。
液相色譜-質譜聯用技術正在不斷拓展定量dànbáizhì組學的應用邊界。從基礎生物學研究到臨床轉化應用,LC-MS/MS以其wúkěbǐnǐ的分離與檢測能力,為生命科學研究提供了強大動力。百泰派克生物科技基于優良的LC-MS/MS平臺,結合系統優化的定量流程,為客戶提供高質量的定量蛋白組分析服務。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
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