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實驗室常用到的實驗：逆轉錄實驗實驗人員通過體外模擬病毒復制過程，以提取的RNA為模板，使用逆轉錄酶催化，合成出與RNA互補的cDNA鏈。終構建cDNA文庫，并從中篩選所需的靶標基因。BUT！小伙伴們做逆轉錄實驗時，1）有沒有深究過RNA逆轉錄出的cDNA能不能真實反映出基因表達信息？2）做實驗時，有沒有發生過內參做的很好，目的基因做不出的情況？如果有發生上述情況，那么需要重新評估逆轉錄實驗結果的有效性。逆轉錄結果有效性的評定逆轉錄實驗結果有效性的評定重要的是盡可能反映樣本中原始RNA模板的信息，
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qPCR實驗易做，但數據分析并非想象中的那么容易！數據分析的好與壞，極大程度上依賴于qPCR原始結果的質量。qPCR結果的評價指標?溶解曲線，是qPCR結果判定的第—要素。它的作用是判定目的基因是否得到擴增。理論上，當反應體系中僅是目標基因的擴增，才是有效擴增。?標準曲線，是qPCR結果判定的金標準。（在溶解曲線判定為特異性擴增后）它的作用是測定引物的擴增效率及試劑的檢測上下限。根據文章發表對于qPCR數據的要求，擴增效率應在90-110%。?擴增曲線，是直接生成qPCR定量的數據，即Ct值。從
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熒光定量PCR實驗是分子實驗室常用的一項技術。持續關注小翊的應該都掌握了高質量cDNA的獲取方法，引物設計指南以及反應體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機時，發現和別人的反應條件不一致卻又不敢動儀器？本期小翊將帶你玩轉qPCR儀器的設置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設置都相對一致。我們以ABI7500為例進行介紹。反應板設置實驗目的選擇：我們將實驗命名為“Yeasen”，進行“Quantitation：ΔΔCt”實驗。實驗方法選擇：如選用SYBRGre
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dsDNAHSAssayKitforQubit®——給我5min，還你一個準確定量結果1產品概述dsDNAAssayKitforQubit®是Yeasen生物開發的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標儀的試劑盒，線性范圍0.2-100ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質、鹽類、洗滌劑等污染物。2產品優勢1）操作簡便——5min之內出結果2）高選擇性——對dsDNA具有高度選擇性，不定量RNA和ssDNA。圖dsDNAAssa
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遺傳中心法則表明，DNA是生物體內遺傳信息的載體。遺傳信息在精密的調控下從DNA轉錄成RNA，再傳遞到蛋白質。因此RNA被認為是DNA與蛋白質之間生物信息傳遞的“橋梁”，在研究轉錄組信息中占有著重大的作用。背景介紹轉錄組（transcriptome）是指在某一特定的生理條件下，細胞、組織或者生物體內所有的轉錄產物的集合，即轉錄出來的所有RNA總和，包括編碼RNA（即mRNA）和ncRNA（tRNA、rRNA、miRNA、lncRNA、circRNA）等不同類型的RNA分子。在這之中核糖體RNA(
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常規轉錄組測序（RNA-Seq）主要是在轉錄水平上對逆轉錄的cDNA進行NGS測序，這樣可以全面快速地獲取某一物種在某一狀態下的幾乎所有轉錄本，包括mRNA和非編碼RNA。目前轉錄組測序主流的方法是芯片法和RNA-Seq法。RNA-Seq相較于芯片法優勢明顯，如：不受物種限制通量高靈敏度高分辨率高同時能夠檢測未知基因，發現新的轉錄本并準確地識別可變剪切位點及SNP、UTR區域等。此次疫情爆發，溯源工作主要是依靠這種方法。圖1常規RNA-Seq建庫流程精品推薦mRNA建庫試劑盒（適用Illumin
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背景介紹熒光素酶生物檢測技術誕生于1990年，已有供了更可靠的研究30年的發展史。單熒光素酶檢測系統到雙熒光素酶檢測系統的發展，為科研人員提供了更為嚴謹的實驗手段。雙熒光素酶報告基因檢測系統在原有的基礎上引入了海腎報告基因，可以排除不同組之間細胞生長狀況、細胞數目以及轉染效率帶來的干擾，起到校正的作用，從而使實驗結果更為可靠。其發光原理如下圖1。圖1雙熒光素酶發光原理實驗方案將靶基因的轉錄調控元件或5’啟動子區克隆在Fireflyluciferase基因的上游，或把3’-UTR區或lncRNA結
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你是否正在驗證miRNA與lncRNA的作用機制？是否在分析確認miRNA的靶基因？在研究轉錄因子和啟動子的實驗中，你是否想確定結合位點的序列？這些問題都可以用雙熒光素酶報告基因檢測系統來嘗試解決。雙熒光素酶報告基因檢測系統介紹基于熒光素酶（luciferase）的發光原理，科學家發明了雙熒光素酶報告基因檢測系統。該系統包括螢火蟲熒光素酶（Fireflyluciferase）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase）。兩者可催化各自的底物發生氧化作用產生生物熒光，產生的熒光數值大小即表
