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常規轉錄組測序(RNA-Seq)主要是在轉錄水平上對逆轉錄的cDNA進行NGS測序,這樣可以全面快速地獲取某一物種在某一狀態下的幾乎所有轉錄本,包括mRNA和非編碼RNA。目前轉錄組測序主流的方法是芯片法和RNA-Seq法。
RNA-Seq相較于芯片法優勢明顯,如:
不受物種限制
通量高
靈敏度高
分辨率高
同時能夠檢測未知基因,發現新的轉錄本并準確地識別可變剪切位點及SNP、UTR區域等。
此次疫情爆發,溯源工作主要是依靠這種方法。
圖1 常規RNA-Seq建庫流程
精品推薦
mRNA建庫試劑盒(適用Illumina平臺&MGI平臺)
樣本適用范圍廣:耐高溫,適合復雜模板mRNA建庫;
片段化可控: 片段大小均可選擇合適的打斷條件;
文庫質量優異:多樣本類型測試,結果均能滿足不同客戶需求;
測序質量優異: rRNA 殘留更低,有效數據占比更多。
圖2. RNA-Seq雙平臺建庫精品
產品特色
特色1. 精簡建庫流程
RNA-Seq建庫流程將常規的二鏈cDNA合成、末端修復和接頭連接合并為一步,建庫流程更精簡,節約時間1.5 h左右,滿足快速建庫需求。
圖3 .常規建庫流程
圖4.12300、13331建庫流程
特色2. 耐高溫的第四代逆轉錄酶
采用耐高溫的第四代逆轉錄酶,對溫度的耐受性高達60℃,有利于RNA模板二級結構的打開,更利于逆轉錄的進行。同時去除RNase H活性,大大避免了逆轉錄過程中RNase H對RNA-DNA雜交分子的RNA降解,提升反轉錄效率。
圖5 .YEASEN第四代逆轉錄酶與常規MMLV逆轉錄酶優勢對比
特色3.優異的測序數據
鏈特異性文庫測序有超過98.5%的Reads比對到正義鏈。同時鏈特異性文庫的 Ambiguity reads更少,基因表達定量更準確。
圖6 .鏈特異性建庫測序質量分析
案例分析
樣本信息:human、Rat、Watermelon
試劑盒:MaxUpⅡ Dual-mode mRNA建庫試劑盒(12300)
測序類型:NovaSeq (PE 150)
測序數據:如下表
測序結果分析:MaxUpⅡ Dual-mode mRNA試劑盒測序數據質量優異,有效數據占比高。
表1. 轉錄組測序數據展示
human | rat | watermelon | |
Total reads | 27002948 | 46433810 | 32042644 |
Mapped reads | 26591411(98.48) | 45579533(98.16) | 31555907(98.48) |
mapped(non-unique) | 785559(2.91) | 2574310(5.54) | 693893(2.17) |
mapped(unique) | 25805852(95.57) | 43005223(92.62) | 30862014(96.32) |
Read-1 | 12931060(47.89) | 21560058(46.43) | 15464666(48.26) |
Read-2 | 12874792(47.68) | 21445165(46.18) | 15397348(48.05) |
Reads map to'+' | 12889843(47.73) | 21487890(46.28) | 15422784(48.13) |
Reads map to'-' | 12916009(47.83) | 21517333(46.34) | 15439230(48.18) |
Non-splice reads | 17278055(63.99) | 29192112(62.87) | 18829168(58.76) |
Splice reads | 8527797(31.58) | 13813111(29.75) | 12032846(37.55) |
Reads mapped in proper pairs | 25055676(92.78) | 41732426(89.88) | 29825204(93.08) |
關于產品
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試劑類別 | 產品名稱 | 貨號 | 規格 | 目錄價/元 | */元 |
Illumina平臺 RNA建庫 | Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® MaxUp II 雙模式mRNA 建庫試劑盒 | 12300ES08/16/96 | 8/16/96 T | 3872/9872/33872 | 2517/6417/22017 |
華大MGI平臺 RNA建庫 | Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for MGI® MaxUp II 雙模式mRNA建庫試劑盒 | 13331ES16/96 | 16/96 T | 8752/36852 | 5689/23954 |
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