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RNA文庫建的好,輕松完成轉錄組測序分析不是夢

2020-4-8  閱讀(754)

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常規轉錄組測序(RNA-Seq)主要是在轉錄水平上對逆轉錄的cDNA進行NGS測序,這樣可以全面快速地獲取某一物種在某一狀態下的幾乎所有轉錄本,包括mRNA和非編碼RNA。目前轉錄組測序主流的方法是芯片法和RNA-Seq法。
RNA-Seq相較于芯片法優勢明顯,如:

不受物種限制
通量高
靈敏度高
分辨率高

同時能夠檢測未知基因,發現新的轉錄本并準確地識別可變剪切位點及SNP、UTR區域等。
此次疫情爆發,溯源工作主要是依靠這種方法。

圖1 常規RNA-Seq建庫流程


精品推薦


mRNA建庫試劑盒(適用Illumina平臺&MGI平臺)
樣本適用范圍廣:耐高溫,適合復雜模板mRNA建庫;
片段化可控: 片段大小均可選擇合適的打斷條件;
文庫質量優異:多樣本類型測試,結果均能滿足不同客戶需求;
測序質量優異: rRNA 殘留更低,有效數據占比更多。

圖2. RNA-Seq雙平臺建庫精品

產品特色


特色1. 精簡建庫流程
RNA-Seq建庫流程將常規的二鏈cDNA合成、末端修復和接頭連接合并為一步,建庫流程更精簡,節約時間1.5 h左右,滿足快速建庫需求。

圖3 .常規建庫流程

圖4.12300、13331建庫流程



特色2. 耐高溫的第四代逆轉錄酶
采用耐高溫的第四代逆轉錄酶,對溫度的耐受性高達60℃,有利于RNA模板二級結構的打開,更利于逆轉錄的進行。同時去除RNase H活性,大大避免了逆轉錄過程中RNase H對RNA-DNA雜交分子的RNA降解,提升反轉錄效率。

圖5 .YEASEN第四代逆轉錄酶與常規MMLV逆轉錄酶優勢對比


特色3.優異的測序數據
鏈特異性文庫測序有超過98.5%的Reads比對到正義鏈。同時鏈特異性文庫的 Ambiguity reads更少,基因表達定量更準確。


圖6 .鏈特異性建庫測序質量分析


案例分析


樣本信息:human、Rat、Watermelon
試劑盒:MaxUpⅡ Dual-mode mRNA建庫試劑盒(12300)
測序類型:NovaSeq (PE 150)
測序數據:如下表
測序結果分析:MaxUpⅡ Dual-mode mRNA試劑盒測序數據質量優異,有效數據占比高。


表1. 轉錄組測序數據展示


humanratwatermelon
Total reads270029484643381032042644
Mapped reads26591411(98.48)45579533(98.16)31555907(98.48)
mapped(non-unique)785559(2.91)2574310(5.54)693893(2.17)
mapped(unique)25805852(95.57)43005223(92.62)30862014(96.32)
Read-112931060(47.89)21560058(46.43)15464666(48.26)
Read-212874792(47.68)21445165(46.18)15397348(48.05)
Reads map to'+'12889843(47.73)21487890(46.28)15422784(48.13)
Reads map to'-'12916009(47.83)21517333(46.34)15439230(48.18)
Non-splice reads17278055(63.99)29192112(62.87)18829168(58.76)
Splice reads8527797(31.58)13813111(29.75)12032846(37.55)
Reads mapped in proper pairs25055676(92.78)41732426(89.88)29825204(93.08)

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Hieff NGS® MaxUp II Dual-mode mRNA Library Prep Kit for Illumina® MaxUp II 雙模式mRNA 建庫試劑盒12300ES08/16/968/16/96 T3872/9872/338722517/6417/22017
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