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miRNA實驗解決方案（操作手冊）---第三章：miRNA 逆轉錄及實時熒光定量 PCR2025/01/08

一、miRNA逆轉錄及實時熒光定量PCR的概念miRNA逆轉錄的概念成熟miRNA的長度只有21~23nt，對miRNA進行qPCR定量時，無法直接對其進行正、反向引物的設計（通常正向引物就足以覆蓋miRNA全長），但是可以通過增加逆轉錄產物長度來解決這一問題，miRNA的逆轉錄方法有兩種，分別是莖環法和加尾法。實時熒光定量PCR的概念實時熒光定量PCR即Real-timePCR,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過Cr值和標準曲線對未知模版進行定量分析的方法。二、miRNA逆轉錄及

miRNA實驗解決方案（操作手冊）---第二章：miRNA提取2025/01/07

一、miRNA提取的方法miRNA提取的難點在于其分子太小，不易被醇類沉淀，也不易被常規的硅膠吸附膜吸附。miRNA的提取方法主要有兩種形式，一種是提取樣品中的總RNA后，通過PAGE電泳或PEG，將總RNA中的小片段RNA分離出來，最后對小片段的RNA進行沉淀回收，從而獲得miRNA。另一種是硅膠柱吸附法，采用特殊硅基質吸附材料在添加適量乙醇的條件下，可特異吸附小片段RNA（小于200nt），最終得到miRNA。傳統方法提取miRNA通常采用第一種，而miRNA提取試劑盒一般采用硅膠柱吸附法。

miRNA實驗解決方案（操作手冊）---第一章：miRNA簡介2025/01/07

一、miRNA的合成途徑在動物細胞核中，miRNA基因的初級轉錄產物Pri-miRNA（長度大約為300～1000nt）被RNaseIIl-Drosha酶切割成為發夾結構前體miRNA（Pre-miRNA，長度大約為70～100nt）。經過初步剪切后，Pre-miRNA在轉運蛋白Exportin-5的作用下由細胞核內轉運到細胞質中，然后由另一種RNaseIll-Dicer酶進一步切割產生成熟的miRNA（長度大約為21～23nt）。成熟的miRNA與類似RISC的核糖體蛋白結合形成miRNA-R

探索蛋白質的新奧秘2024/12/25

親愛的各位科研小伙伴，是不是還為找不到特異的磷酸化抗體而發愁？今天將為你介紹一款令人振奮的科研利器--Phos-tag!這不僅是一種磷酸結合標簽，更是一位幫你解鎖蛋白質世界秘密的超級助手！GLPbio的Phos-tag（目錄號GK10005），一種創新的科研工具，可在中性pH條件下特異性捕獲蛋白質磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質。它就像一個磷酸“獵手”，特異性地結合磷酸基團，不放過任何一個氨基酸的磷酸化！深入探究蛋白質世界Phos-tag提供了一種名為“錳(II)-Phos-tagSDS-PA

如何高效學習并掌握實驗操作？2024/06/26

學會一個實驗為什么很困難？旁觀揣摩、網絡搜索、屢做屢錯。是大部分同學學習實驗的真實寫照。為什么會這樣？因為，大部分實驗室沒有專門的課程或資料來幫助新生學習實驗知識。所以，大家只能靠看、靠搜、靠猜。這種學習方法，效率低，學來的方法是對是錯也是一個疑問。而且，師兄師姐好不容易搞清楚的實驗細節和注意事項，卻隨著他們的畢業，方法也隨之“失傳”。實驗知識的沉淀，非常困難，同樣的問題可能每一屆都會出現。看書自學或參加系統課程？系統的實驗知識學習體系，對于每一個實驗室，每一位研究生來說，很必要。書本上的知識大

每天感到疲倦、情緒低落？可能是這個功能在減退2024/06/24

【好困，好累，好煩】，如果每天都感覺疲憊、精神不濟、心情不佳，那么這種情況可能是甲狀腺功能在減退！甲狀腺分泌的甲狀腺激素可通過血液運輸到全身，廣泛調節新陳代謝，堪稱人體的「發動機」。而甲狀腺功能減退癥（簡稱甲減）是甲狀腺激素缺乏導致的一組臨床綜合病征，可表現出不同程度的情緒異?；蛘哒J知功能下降。其實，榮登熱榜的「天天喊累的人，建議去查一下甲狀腺」話題并非空穴來風。2024年3月22日，韓國科學家在JournalofPersonalizedMedicine發表研究，研究人員通過對一位嗜睡并時常感到

質粒圖譜2024/06/24

質粒圖譜為質粒DNA序列的物理圖譜，提供了包括質粒的大小、篩選標記、克隆位點、轉錄及翻譯元件等信息，為我們選擇質粒、了解質粒特點及應用提供了重要依據。對于初學者來說該如何去閱讀質粒圖譜呢？今天來給大家講解一下如何閱讀質粒圖譜及構建質粒圖譜。質粒的組成要素有哪些復制起始位點：Ori即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。抗生素抗性基因：可以便于加以檢測，如Amp+,Kan+。多克隆位點MCS：克隆攜帶外源基因片段。P/E啟動子/增強子Te

Tamoxifen誘導Cre-ERT2小鼠 使用指南2024/06/20

Cre-ERT2小鼠是一類含有雌激素受體的配體結合區突變體（ERT）與cre重組酶的融合蛋白表達的小鼠。Cre-ERT2在無Tamoxifen誘導的情況下，在細胞質內處于無活性狀態；當Tamoxifen誘導后，Tamoxifen的代謝產物4-OHT（雌激素類似物）與ERT結合，可使Cre-ERT2進核發揮Cre重組酶活性。Tamoxifen給藥建議如下：3.他莫昔芬的給藥方式他莫昔芬可以通過腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應用比較廣的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準，便于控制。腹腔注

熱激轉化大腸桿菌的原理2024/06/20

鈣離子使得DNA沉淀于細胞表面，在熱激使得細胞膜出現間隙后，進入胞內，實現轉化的目的。這個過程主要分2步：1.低溫、低滲的鈣離子溶液，能使得大腸桿菌細胞膨脹；鈣離子使得細胞膜通透性改變，容易粘附外源DNA，形成羥基-磷酸鈣復合物。2.42°C熱激細胞，細胞膜產生擾動，出現間隙。粘附在細胞膜的dna通過膜通道，進入到細胞中，實現轉化。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具

WB實驗詳細步驟及用到的相關試劑匯總2024/06/17

以下是WB實驗的詳細步驟及相關試劑耗材匯總：一、實驗步驟1.蛋白提?。菏褂眠m當的裂解液提取蛋白。2.蛋白定量：采用Bradford法或BCA法等測定蛋白濃度。3.SDS-PAGE電泳：配制分離膠和濃縮膠，上樣進行電泳。4.轉膜：將蛋白從凝膠轉移到PVDF或NC膜上。5.封閉：用封閉液封閉膜。6.一抗孵育：加入一抗，室溫或4℃孵育。7.洗滌：用洗滌液多次洗滌膜。8.二抗孵育：加入相應的二抗，孵育后洗滌。9.顯色：使用化學發光試劑顯色，曝光并成像。二、試劑耗材1.試劑：裂解液、PBS、蛋白上樣緩沖液

假陽性？條帶不對？菌液PCR問題一網打盡2024/06/13

1.平板長菌，但挑的單克隆菌落搖不起來？產生原因及解決辦法：（1）挑取的單克隆為雜菌，呈假陽性。出現這種情況的原因包括：①配制平板過程中，加入抗生素時溫度過高致使抗生素滅活；②配制平板過程中，抗生素濃度過低；③平板培養時間太長導致抗生素失效。（2）液體培養基的抗生素使用錯誤。（3）液體培養基抗生素濃度過高，導致大腸桿菌生長緩慢。（4）菌液保存太久，導致菌的活力過低。辦法：重新劃線涂板，挑取單克隆。（5）自己制備的感受態細胞受到雜菌污染。（6）噬菌體污染?，F象描述：菌液清亮或渾濁后變為清亮，底部有

睡眠：一個被忽視的公共衛生問題2024/06/12

《柳葉刀-糖尿病與內分泌學》（TheLancetDiabetes&Endocrinology）發表社論指出，對于18歲及以上的成年人，每天建議的睡眠時間為7-9小時，但實時經濟、現代生活方式、工作壓力和生活環境對許多人的睡眠時間、睡眠時長和質量都有不利影響。如此多的人正在經歷睡眠問題，且其對教育、就業、健康和經濟產生了眾多連鎖反應，睡眠作為一個公共衛生問題應引起重視。顯然，睡眠問題不僅僅是英國存在的問題，而是普遍存在的，影響著所有群體。然而，與提倡戒煙、健康飲食和身體活動的健康宣傳活動相比，人們

細胞培養實驗步驟詳解2024/06/12

以下是細胞培養實驗常見的步驟及用到的產品：步驟：1.準備工作：超凈工作臺消毒；-用到的產品：75%酒精等；2.培養基配制：將基礎培養基與血清等添加物混合；-用到的產品：基礎培養基（如DMEM、RPMI1640等）、血清（如胎牛血清）、雙抗（青霉素、鏈霉素）等。3.細胞復蘇：從液氮中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中融化，轉移至培養瓶中。-用到的產品：凍存管。4.培養：將細胞放入培養箱中培養，保持適宜溫度、濕度和二氧化碳濃度。-用到的產品：培養瓶、培養皿等。5.換液：定期更換新鮮培養基。6.細胞傳

提高效率與質量的實用技巧2024/06/12

1、提高實驗的效率1）實驗前有計劃安排、預備方案或者“車輪戰”（細胞實驗）一般從基礎的培養細胞開始，開始實驗時，實驗方法一般來自于實驗室或者文獻中條件優化以及自我推測及驗證，因此做實驗之前預想實驗方案有助于我們不至于“手忙腳亂”。以實驗前的細胞鋪板實驗為例：表1常用細胞培養體系：細胞鋪板的孔數一般取決于我們后期實驗的目的，實驗前了解各類細胞的鋪板數量以及培養基添加量都十分重要。以病毒或者細菌感染細胞模型來說，我們需要一個比較準確數量級的細胞數目和病毒或菌液濃度得后期實驗的MOI值，細胞計數和病毒

細胞穩定轉染的操作步驟及經驗分享2024/06/12

細胞穩定轉染是一種常用的基因傳遞技術，其中慢病毒轉染作為一種有效的手段被廣泛采用。通過慢病毒載體，可將目的基因序列穩定地整合到宿主細胞基因中，實現長期穩定的表達。這種轉染方法不僅能夠在多種細胞系中高效地實現基因傳遞，還能夠實現對特定基因的穩定表達，為基因功能研究和細胞工程提供了重要工具。早在1981年，科學家們發現并研究了人類免疫缺陷病毒I型（HIV-1），從而掀開了慢病毒作為載體的研究序幕。慢病毒（Lentivirus）載體是通過HIV-1進行改造而得到的，其具備感染細胞的能力，包括分裂期和非

不止助眠！我國學者發現褪黑素還能延緩腎臟衰老2024/06/11

研究人員發現，褪黑激素在維持線粒體穩態中起著至關重要的作用。p53、p21、p16和SASP的表達上調是細胞衰老的標志，與對照(Ctrl)組相比，阿特拉津組p53、磷酸化p53(p-p53)、p21和p16蛋白水平升高，SASPmRNA的表達上調，parkin水平下降。通過褪黑激素的補充，可以降低衰老相關標志物的表達，并減輕阿特拉津引起的腎小管上皮細胞衰老。此外，褪黑激素通過激活Sirtuin3-超氧化物歧化酶2軸，消除了腎臟中活性氧的積累，抑制腎臟氧化應激和線粒體損傷。褪黑激素，又名5甲氧基-

免疫組化實驗詳細步驟匯總2024/06/11

步驟：1.切片準備：將組織進行石蠟包埋，切成薄片并貼附于載玻片上。-用到的產品：載玻片等。2.烤片：將切片放入烤箱中適當溫度烤片，使切片緊密貼附。3.脫蠟：依次使用二甲苯等進行脫蠟處理。-用到的產品：二甲苯、乙醇等。4.水化：梯度乙醇水化至水。5.抗原修復：根據需要選擇合適的抗原修復方法，如熱修復或酶修復等。-用到的產品：抗原修復液等。6.滅活內源性過氧化物酶：使用過氧化氫溶液處理。-用到的產品：3%過氧化氫溶液。7.封閉：用血清或BSA等封閉非特異性結合位點。-用到的產品：封閉液。8.一抗孵育

提取基因組，細胞裂解是用物理方法、化學法還是酶解法？2024/06/06

提取基因組，細胞裂解是用物理方法、化學法還是酶解法？物理方法化學方法大部分用化學法，但也有可能搭配使用。細胞裂解的物理放方法指的是機械破碎，如勻漿法、研磨法、超聲波處理法，還有反復凍融的方法。酶解法是將溶菌酶或蛋白酶K將入，使細胞壁破碎?；瘜W法是使用含SDS或CTAB的溶液來對細胞進行處理，在一定的pH環境和變性條件下,細胞破裂,蛋白質變性沉淀,核酸被釋放到水相現在常用的是基因組提取試劑盒，大部分是用化學法裂解的。但如果碰上一些特殊的實驗樣本，還需要多種方法搭配使用。例如真菌，僅靠化學方法無法有

慢病毒制備和導入細胞的操作步驟及注意事項2024/06/06

前置知識通過病毒介導將核酸導入哺乳動物細胞是一種常用的實驗技術，被廣泛用于基因傳遞、基因表達和功能研究等領域。這個實驗通常分為以下6個部分：1.選擇適當的病毒載體：常用的病毒載體包括腺病毒（Adenovirus）、腺相關病毒（Adeno-associatedvirus，AAV）和逆轉錄病毒（Retrovirus）。2.構建表達載體：將目標核酸（例如基因、RNA等）插入到病毒載體的適當位點上，構建表達載體。這通常涉及將目標核酸序列克隆到適當的表達載體質粒中，并進行驗證和測序。3.病毒包裝和擴增：將

什么是基因編輯技術？（下）2024/06/05

四、轉錄激活樣效應因子核酸酶技術（TALEN）轉錄激活樣效應（TranscriptionActivator-LikeEffector,TALE）核酸酶（Nucleases,TALENs）是一種基因編輯工具，其工作原理與鋅指核酸酶（ZFNs）類似，但是它們使用不同的DNA結合蛋白。TALEN是一種人工制造的蛋白質，由兩部分組成：一個DNA結合域（TALE）和一個FokI核酸酶。1、TALEDNA結合域TALE蛋白是由植物病原體Xanthomonas細菌產生的，它們可以識別并結合到植物基因中的特定序