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蛋白免疫檢測技術(shù)2025/05/20

蛋白免疫檢測技術(shù)是基于抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，用于檢測生物樣品中蛋白質(zhì)的存在、含量、分布及相互作用的一類分析技術(shù)。這類技術(shù)具有高特異性、高靈敏度等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、生物學(xué)研究、藥物開發(fā)等領(lǐng)域。以下是幾種常見的蛋白免疫檢測技術(shù)及其原理、應(yīng)用和特點(diǎn)：一、酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）原理將抗原或抗體固定在固相載體（如微孔板）表面，通過酶標(biāo)記的抗原或抗體與待測樣品中的目標(biāo)蛋白結(jié)合，加入底物后酶催化顯色反應(yīng)，通過吸光度值定量分析目標(biāo)蛋白。類型直接法：標(biāo)記抗體直接結(jié)合抗原。間接法：用未標(biāo)記的一

PCR技術(shù)2025/05/12

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)由美國生物化學(xué)家凱利·穆利斯于1983年發(fā)明，其核心原理是通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟的循環(huán)，利用DNA聚合酶特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。早期的PCR擴(kuò)增受限于耐高溫酶的缺失，效率非常低，因此在科研實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域接受度并不高。直至1986年，水生棲熱菌來源的Taq酶的應(yīng)用，才實(shí)現(xiàn)PCR穩(wěn)定、自動化的高效擴(kuò)增。PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)一直以來不斷發(fā)展，例如基于普通PCR技術(shù)通過優(yōu)化反應(yīng)流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動酶提高擴(kuò)增特異性的HotstartPCR、基于熒光檢測技術(shù)

超高速離心時其他條帶里的成分分析2025/05/12

超高速離心技術(shù)常用于分離和純化生物大分子、細(xì)胞器以及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)等，不同樣本在超高速離心后，各條帶的成分會有所不同。以下從常見樣本類型出發(fā)，分析其他條帶里的成分。一、細(xì)胞裂解液樣本細(xì)胞經(jīng)裂解后，釋放出細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)。在超高速離心過程中，會根據(jù)物質(zhì)的密度、大小和形狀形成不同條帶。（一）上層條帶通常是密度較低的成分，主要包含細(xì)胞質(zhì)中的水溶性蛋白、代謝產(chǎn)物、小分子營養(yǎng)物質(zhì)和離子等。例如，參與細(xì)胞糖酵解途徑的各種酶，像己糖激酶、磷酸果糖激酶等，它們在細(xì)胞能量代謝中發(fā)揮重要作用；還有細(xì)胞代謝產(chǎn)生的乳酸、丙

ZETA LIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞2025/04/28

ZETALIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞細(xì)胞接種：提前1天將細(xì)胞接種到培養(yǎng)板，如6孔板，使用含10%胎牛血清的高糖型DMEM培養(yǎng)基，且培養(yǎng)基中不加雙抗，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到60%-80%左右。質(zhì)粒準(zhǔn)備：使用無內(nèi)毒素提取試劑盒提取質(zhì)粒，將其溶解于無菌雙蒸水或超純水中，保證質(zhì)粒濃度在500-700ng/ul左右。復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與ZetaLifeAdvancedTransfectionReagent按照1:1的比例直接混合，例如12ug質(zhì)粒對應(yīng)12ul轉(zhuǎn)染試劑，用移液器吹吸10-

細(xì)胞轉(zhuǎn)染全過程及ZETA LIFE解決方案2025/04/28

細(xì)胞轉(zhuǎn)染指的是將外源遺傳物質(zhì)，如DNA、RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。依據(jù)原理差異，轉(zhuǎn)染方法主要分為化學(xué)介導(dǎo)（如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、磷酸鈣共沉淀法）、物理介導(dǎo)（如電穿孔轉(zhuǎn)染法）和生物介導(dǎo)（如病毒感染）。不同方法各有優(yōu)劣，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法操作便利、轉(zhuǎn)染率較高，適用于多數(shù)細(xì)胞系；磷酸鈣共沉淀法雖成本低，但重復(fù)性欠佳，對細(xì)胞毒性較大；電穿孔轉(zhuǎn)染法可適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但對細(xì)胞損傷較大；病毒感染轉(zhuǎn)染效率高，然而技術(shù)難度大，在普通實(shí)驗(yàn)室較難普及。細(xì)胞轉(zhuǎn)染全過程準(zhǔn)備階段細(xì)胞培養(yǎng)：在轉(zhuǎn)染前1-2天，選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)新手答疑帖（內(nèi)含污染、傳代、復(fù)蘇的問題&解析）2025/04/27

1.污染Q：以下圖片中的細(xì)胞是否已污染？這些小黑點(diǎn)，PBS沖洗能去掉大部分，但第二天會重新出現(xiàn)。A：圖中的細(xì)胞存在微生物污染，在細(xì)胞與細(xì)胞間隙之間，有大量的小黑點(diǎn)聚集，且形狀基本上都是規(guī)則的顆粒狀。當(dāng)使用PBS沖洗時，能洗掉大部分，但卻無法全部清楚，因?yàn)橹灰獨(dú)埩魳O少量的微生物，還是會繼續(xù)繁殖的。從問題描述來看，PBS沖洗后第二天黑點(diǎn)就重新出現(xiàn)，憑這一點(diǎn)就可以輔助我們進(jìn)行判斷——這是微生物污染。如果PBS沖洗后，黑點(diǎn)不再出現(xiàn)，那么黑點(diǎn)可能只是培養(yǎng)物碎片/雜質(zhì)，但如果會不斷增加、無法全部清除，就肯定

小分子蛋白如何跑WB?2025/04/27

在日常實(shí)驗(yàn)過程中，小分子蛋白是非常常見的，常見的凋亡蛋白如Bcl2、Caspase-3、Bax，自噬相關(guān)蛋白如LC3B等均為小分子蛋白，接下來將從以下幾個方面分享小分子蛋白跑Wb時的注意事項(xiàng)：1.配膠：整體配膠遵循蛋白分子量越小膠濃度越大的原則，對于小分子蛋白來說，分離膠濃度一般為12%-15%，對于小分子蛋白條帶可以分的更加清晰。同時在倒膠時濃縮膠的比例可以適當(dāng)增加到4：6，使其充分濃縮，后續(xù)電泳過程中一定程度上可以減少彌散。2.上樣：根據(jù)日常上樣經(jīng)驗(yàn)，建議在跑小分子蛋白時增加1倍上樣量，防止

如何合理設(shè)計(jì)細(xì)胞加藥濃度？2025/04/25

1.概述藥物，或一切化學(xué)品對細(xì)胞的生理狀態(tài)是否能造成影響，能造成多大的影響，是生物學(xué)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)之一。CCK-8與MTT等藥物毒性實(shí)驗(yàn)就是一種測量方法。我們都知道“脫離劑量談毒性都是耍潑皮”，那么如何設(shè)置實(shí)驗(yàn)中藥物的濃度呢？通常有兩種情形：直接取一個固定的濃度，如40μM；設(shè)置一組濃度梯度，如10μM、30μM、100μM。這二者有什么不同？如何針對自己的實(shí)驗(yàn)需求來選擇呢？我們將在下文介紹。2固定濃度的情形一般來說，如果文獻(xiàn)直接甩出一個固定濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，沒有進(jìn)行量效測試，說明這個藥物的效應(yīng)是已知的

科研人技能！固體培養(yǎng)基的配制及儲存注意事項(xiàng)2025/04/24

1前言在微生物學(xué)研究中，培養(yǎng)基扮演著至關(guān)重要的角色，它為微生物的生長提供了一個可靠的環(huán)境，是其生長繁衍的營養(yǎng)基質(zhì)。其中，不含凝固劑（如瓊脂）、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基，我們稱為液體培養(yǎng)基；呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。向液體培養(yǎng)基中加入瓊脂后制成的瓊脂固體培養(yǎng)基，是我們在實(shí)驗(yàn)室中最經(jīng)常用的培養(yǎng)基之一，微生物在固體培養(yǎng)基的表面可形成肉眼可見的菌落。今天我們就來聊聊固體培養(yǎng)基的配制及儲存注意事項(xiàng)。2固體培養(yǎng)基的配制首先，我們需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適合的固體培養(yǎng)基配方。常見的固體培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)

西瓜使用甜蜜素是謠言2025/04/23

夏日炎炎，西瓜堪稱消暑圣品。那清甜的口感，多汁的果肉，讓人為之陶醉。但你是不是也曾有過這樣的疑惑：西瓜咋就這么甜？是不是打了甜蜜素？今天，咱們就從化學(xué)的角度來破除這個謠言！西瓜甜的自然原因糖類物質(zhì)的積累西瓜中的糖類主要有蔗糖、果糖和葡萄糖等。在西瓜生長過程中，葉片通過光合作用制造出碳水化合物，并將其運(yùn)輸?shù)焦麑?shí)中儲存起來。隨著西瓜的成熟，這些糖類物質(zhì)不斷積累，使西瓜變得越來越甜。例如，果糖的甜度相對較高，在西瓜成熟后期，果糖的含量增加，會使西瓜的甜度明顯提高。不同品種的西瓜含糖量有所差異，一些優(yōu)良

如何更好地檢測細(xì)胞凋亡2025/04/22

要更好地檢測細(xì)胞凋亡，可從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、方法選擇、操作流程、數(shù)據(jù)分析等多個環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化，具體如下：優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1.設(shè)置合理對照：設(shè)置陽性對照（如已知可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的處理組）和陰性對照（正常未經(jīng)處理的細(xì)胞組），有助于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系的可靠性和檢測方法的有效性。例如，在研究某種藥物對細(xì)胞凋亡的影響時，陽性對照可采用已知的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞，以確認(rèn)檢測方法能夠準(zhǔn)確檢測到細(xì)胞凋亡的發(fā)生；陰性對照則為正常培養(yǎng)的細(xì)胞，用于排除非特異性因素對檢測結(jié)果的干擾。2.選擇合適細(xì)胞模型：根據(jù)研究目的選擇合適的細(xì)胞類型和培

單細(xì)胞測序2025/04/21

單細(xì)胞測序是高通量測序技術(shù)的一種應(yīng)用，通過分離單個細(xì)胞，然后對其基因組、轉(zhuǎn)錄組、表觀基因組和蛋白質(zhì)組進(jìn)行測序，以此揭示細(xì)胞與細(xì)胞間的異質(zhì)性。實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)主要包括單細(xì)胞分離、文庫構(gòu)建和測序以及數(shù)據(jù)分析。這項(xiàng)技術(shù)能夠在單個細(xì)胞的分辨率下解析基因表達(dá)、突變或染色質(zhì)狀態(tài)，能廣泛應(yīng)用于發(fā)育生物學(xué)、腫瘤微環(huán)境、免疫細(xì)胞分化和神經(jīng)科學(xué)等研究領(lǐng)域。單細(xì)胞測序后的數(shù)據(jù)分析通常包括：原始數(shù)據(jù)質(zhì)控、序列比對、基因表達(dá)定量、批次效應(yīng)校正和細(xì)胞聚類分析等。需要通過特定的生物信息學(xué)工具（如Seurat、Scanpy）鑒定細(xì)胞類

離心分離生物顆粒如何選擇梯度材料2025/04/18

1概述除了差速離心，實(shí)驗(yàn)室中分離生物材料還有密度梯度離心法。此法又可以分為速率區(qū)帶離心和等密度離心，都需要制備梯度材料，將待分離物加入梯度材料后通過一定離心力將不同生物顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶。速率區(qū)帶離心：僅能分離沉降系數(shù)差≤20%的顆粒或分子量相差能達(dá)到3倍的蛋白質(zhì)。此法與顆粒密度無關(guān)。適用于分離密度相同而大小不同的物質(zhì)。等密度離心：此法通過梯度介質(zhì)產(chǎn)生能夠覆蓋待分離物質(zhì)密度范圍的密度梯度，通過離心使不同密度的顆粒懸浮到相應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。顆粒的密度是影響最終位置的僅有因素

從原理到實(shí)操，蝦青素抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)流程！（4）2025/04/17

4殼聚糖蝦青素納米顆粒對肝纖維化小鼠肝損傷生長的抑制4.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的科學(xué)依據(jù)劑量選擇：參考文獻(xiàn)中蝦青素有效劑量（10-60mg/kg/d）及殼聚糖納米遞送系統(tǒng)的生物利用度優(yōu)化結(jié)果。陽性對照：選用索拉非尼（5mg/kg/d）驗(yàn)證殼聚糖蝦青素納米顆粒與傳統(tǒng)化療藥物的效果差異。檢測指標(biāo)關(guān)聯(lián)性：肝損傷體積/重量：直接評估抗肝損傷效果。凋亡相關(guān)蛋白（Bax/Bcl-2）：揭示誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制。肝組織病理學(xué)：觀察肝損傷壞死及正常組織損傷程度。4.2技術(shù)路線肝纖維化模型建立→肝損傷增殖/氧化應(yīng)激→殼聚糖蝦青

從原理到實(shí)操，蝦青素抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)流程！（3）2025/04/17

3C57小鼠肝纖維化模型每周監(jiān)測在肝纖維化模型建立過程中，每周系統(tǒng)監(jiān)測小鼠的體重、活動度及毛發(fā)狀態(tài)是評估模型進(jìn)展、藥物干預(yù)效果及動物福利的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以下為具體操作流程及注意事項(xiàng)：3.1監(jiān)測頻率與時間點(diǎn)監(jiān)測頻率：每周固定時間點(diǎn)（如每周一上午9:00-11:00）監(jiān)測1次。監(jiān)測周期：模型誘導(dǎo)期：DMN注射開始至建模完成（通常4-6周）。干預(yù)治療期：給藥開始至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)（通常4-8周）。3.2具體監(jiān)測方法與記錄標(biāo)準(zhǔn)3.2.1體重稱量操作步驟：1.設(shè)備準(zhǔn)備：使用精度0.1g的電子天平，校準(zhǔn)歸零。2.小鼠固

從原理到實(shí)操，蝦青素抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)流程！（1）2025/04/17

1實(shí)驗(yàn)原理C57BL/6J小鼠可通過化學(xué)誘導(dǎo)（如二甲基亞硝胺DMN）建立肝纖維化模型。肝纖維化進(jìn)展伴隨以下病理特征：HSC活化→肌成纖維細(xì)胞增殖，分泌Ⅰ/Ⅲ型膠原。ECM失衡：基底膜膠原（Ⅳ型）被纖維膠原替換，MMP/TIMP失調(diào)致降解受阻。肝竇毛細(xì)血管化：內(nèi)皮窗孔消失→物質(zhì)交換障礙+門脈高壓。纖維間隔：橋接纖維分割肝小葉→假小葉（肝硬化標(biāo)志）。炎癥驅(qū)動：TGF-β、PDGF等持續(xù)激活HSC。可逆窗口：早期（F1-F2）干預(yù)可逆，晚期（F3-F4）不可逆→肝癌風(fēng)險↑。蝦青素(Astaxanthi

從原理到實(shí)操，蝦青素抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)流程！（2）2025/04/17

2DMN（二甲基亞硝胺）誘導(dǎo)C57小鼠肝纖維化模型建立2.1原理二甲基亞硝胺（DMN）通過肝臟代謝生成甲基自由基，直接損傷肝細(xì)胞及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，激活炎癥反應(yīng)（TNF-α、IL-6釋放）和肝星狀細(xì)胞（HSC）活化，促進(jìn)膠原蛋白（Ⅰ/Ⅲ型）異常沉積，最終形成肝纖維化。其機(jī)制不依賴致癌性基因突變，而通過氧化應(yīng)激與ECM代謝失衡驅(qū)動纖維化進(jìn)程。2.2實(shí)驗(yàn)步驟2.2.1動物準(zhǔn)備品系選擇：雄性C57BL/6J小鼠（6-8周齡），雄性對DMN肝毒性更敏感。環(huán)境適應(yīng)：SPF級環(huán)境中適應(yīng)1周，自由攝食飲水，維持1

如何解決細(xì)胞鋪板不均勻的問題2025/04/15

細(xì)胞鋪板不均勻會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性造成影響，解決這一問題可從實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備、鋪板操作、后續(xù)處理等方面著手：實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備確保細(xì)胞狀態(tài)良好：選用處于對數(shù)生長期、活力高且形態(tài)正常的細(xì)胞。比如培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，需定期觀察細(xì)胞形態(tài)，若細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、空泡等異常，應(yīng)及時調(diào)整培養(yǎng)條件或重新復(fù)蘇細(xì)胞，避免使用狀態(tài)不佳的細(xì)胞進(jìn)行鋪板。充分重懸細(xì)胞：消化細(xì)胞后，使用合適的培養(yǎng)基輕柔吹打，次數(shù)控制在10-20次，使全部細(xì)胞團(tuán)塊分散，形成單細(xì)胞懸液。例如培養(yǎng)293T細(xì)胞，消化后用移液器吸取培養(yǎng)基，從培養(yǎng)皿底部緩慢吹打

細(xì)胞鋪板具體操作及流程2025/04/14

細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的基礎(chǔ)操作，其目的是將細(xì)胞均勻分布在培養(yǎng)板上，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。下面為你介紹詳細(xì)操作流程：1.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備材料：細(xì)胞懸液、培養(yǎng)基、胰酶、PBS緩沖液、血清、96孔板或24孔板等培養(yǎng)板。器材：移液器及配套槍頭、離心機(jī)、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺、倒置顯微鏡。試劑配制：提前配制好含10%血清的培養(yǎng)基，若細(xì)胞貼壁性差，還需用多聚賴氨酸對培養(yǎng)板進(jìn)行包被處理，即將適量多聚賴氨酸溶液加入培養(yǎng)板各孔，室溫孵育1-2小時，吸去溶液，用PBS沖洗2-3次，晾干備用。2.細(xì)胞懸液制備取出

蛋白磷酸化解決方案2025/04/11

創(chuàng)新磷酸結(jié)合標(biāo)簽GLPBIO的PHOS-TAG,一種創(chuàng)新的科研工具，可在中性PH條件下特異性捕獲蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸上的磷酸基團(tuán)，不放過任何一個氨基酸的磷酸化!深入探究蛋白質(zhì)世界PHOS-TAG提供了一種名為“錳·PHOS-TAGSDS-RAGE"的電泳技術(shù)，讓你可以同時分析蛋白質(zhì)的磷酸化和非磷酸化狀態(tài)。磷酸化水平越高,電泳速度越慢,讓你深入研究蛋白質(zhì)信號傳導(dǎo)通路的活性!原理分析PHOS-TAG通過與鋅離子或錳離子等重金屬離子形成一個半封閉的空間，創(chuàng)造了一個屬于自己的環(huán)境。在中性PH值范