美國藥典第<86>章允許使用非動物來源的試劑進行細菌內毒素檢測，包括使用重組級聯試劑（rCR，Recombinant Cascade Reagent）和重組C因子試劑（rFC，Recombinant Factor C）。本文展示了Sievers®Eclipse細菌內毒素（BET，Bacterial Endotoxins Testing）檢測儀與rCR試劑在化驗各種藥品時的適用性和相容性，為鱟試劑（LAL，Limulus Amoebocyte Lysate）細菌內毒素檢測提供了高效、非動物來源的替代方法。
我們對7種已發布的市售產品進行了方法適用性和優化分析。我們用Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀運行了一個批次的市售重組級聯試劑（rCR），并對比了同一生產商的動態顯色法鱟試劑。在本研究中測試的7種市售產品列于表1中。
表1：用Eclipse測試的產品
Sievers Eclipse細菌內毒素檢測儀采用動態方法來分析標準曲線和最多21個帶陽性對照（PPC，Positive Product Controls）的樣品。Sievers Eclipse微孔板預置來自參考標準內毒素（RSE，Reference Standard Endotoxin）的標準品和陽性對照（PPC），用戶僅需使用1 mL的鱟試劑即可運行每次最多5點的標準曲線（范圍：50 – 0.005 EU/mL）的化驗。
市售的rCR試劑與顯色法試劑類似，具有LAL級聯結構。本研究旨在確定這種rCR試劑在進行現實生活樣品測試時的表現是否確實與傳統的動態顯色法鱟試劑相似。我們用Sievers Eclipse對每種產品分別使用rCR試劑和動態顯色法試劑進行測試。
我們通過測試不同稀釋倍數的細菌內毒素檢查用水（LRW，LAL Reagent Water）來對全部產品進行初步篩選，以確定哪種稀釋度可以實現最佳PPC回收率和克服樣品干擾。我們分析的稀釋倍數包括1:1、1:10、1:20、1:50、1:100。表2是初步篩選出來的各種試劑類型的品名和稀釋倍數。在測試產品時，我們對胰島素、紅霉素、氯化鉀進行了多種稀釋倍數的測試，以便在完成產品篩選后得到更多的結果并克服樣品干擾。
表2：產品的稀釋倍數
測試結果總結如下。表3和表4是標準曲線的結果，表5-10是樣品的結果。
表3：動態顯色法鱟試劑的5點標準曲線結果：使用Sievers Eclipse測試
表4：重組級聯試劑的5點標準曲線結果：使用Sievers Eclipse測試
氯化鉀
表5：Sievers Eclipse測試的氯化鉀液結果（每個板上有3或5份重復樣品）
紅霉素
表6：Sievers Eclipse測試的紅霉素液結果（每個板上有3或5份重復樣品）
*一個重復樣品有分孔
**所有3個重復樣品中都有分孔
***一個重復樣品的%CV > 15
5%葡萄糖
表7：Sievers Eclipse測試的5%葡萄糖液結果（每個板上有3份重復樣品）
0.9%氯化鈉
表8：Sievers Eclipse測試的0.9%氯化鈉液結果（每個板上有3份重復樣品）
乳酸林格氏液
表9：Sievers Eclipse測試的乳酸林格氏液結果（每個板上有3份重復樣品）
人胰島素注射液
表10：Sievers Eclipse測試的人胰島素注射液結果（連續編號的板上有3、5或6份重復樣品）
*一個重復樣品有分孔
注射用水
表11：Sievers Eclipse測試的注射用水結果（每個板上有3份重復樣品）
對于本研究中的大多數現實生活樣品類型來說，Sievers Eclipse與市售的重組級聯試劑有適用性和相容性。紅霉素和胰島素樣品均有多個分孔，很可能是由于樣品干擾。如果實驗室考慮使用非動物來源的試劑進行符合USP <86>標準的細菌內毒素檢測，則可以用Sievers Eclipse微孔板來優化rCR試劑。
為了便于以后分析，在比較rCR試劑和鱟試劑時，必須進行樣品篩選以確定每種產品的最佳稀釋倍數。當有更多批次的市售試劑可用時，也應對其進行測試以確認結果的準確度和可重復性。
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