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液相色譜分析倍他樂克片降解產物中的應用
閱讀：408 發布時間：2023-3-25摘要Agilent 1200 系列液相色譜方法開發解決方案具有最大的靈活性和高度自動化。本文將該系統用于尋找分析藥物降解產物的最佳分離條件。以倍他樂克片為例，將其暴露在高溫條件下，使其產生降解產物，在幾根色譜柱上進行了如下分析：• 用安捷倫化學工作站方法篩選向導自動設置方法和序列• 不同選擇性的 6 根 Agilent ZORBAX RRHT 色譜柱• 不同流動相• 不同溫度和梯度
前言在進行新藥開發時，分析活性藥物的存放期限和穩定性非常重要，必須確保最終的片劑不會生成無法預期和潛在有害的降解產物。這些片劑要在不同條件下進行破壞試驗，并分析其降解產物，一般采用HPLC 法。為了保證沒有其它異常化合物與主成分共洗脫，必須確定所用的分析方法可以分離樣品中的所有化合物。因此，需要進行液相色譜分析方法開發。一般來說，為了實現快速篩選，并對方法最終微調獲得良好的起始條件，開始要試驗一系列色譜柱和溶劑。這種方法篩選過程有助于找到分離目標系列化合物的最適宜色譜柱和流動相。通常，由于整個過程不能自動進行，所以非常費時。Agilent 1200 系列液相色譜方法開發解決方案提供了一個高度靈活的系統，最多可以使用 8 根 100 mm 長的色譜柱，或 6 根300 mm 長色譜柱。另外，安捷倫化學工作站的方法篩選向導將自動設置方法和序列，以篩選各種色譜柱、溶劑、預設梯度和溫度的組合。另外，為了進行全自動方法開發和優化，該系統還可以與復雜的方法開發軟件相結合，如：• 來 自 ACD/Labs 用于化學工作站的ACD/AutoChrom• 來自 ChromSword Baltic在本應用報告中，我們將報導：• 以倍他樂克片降解產物為例，如何用安捷倫化學工作站方法篩選向導設置序列• 用 6 根不同色譜柱和兩套不同流動相分析降解產物• 用一根色譜柱和兩種不同梯度，采用兩種不同溫度進行微調
實驗儀器Agilent 1200 系列高分離度快速液相色譜系統，組合了 Agilent 1200 系列液相色譜方法開發解決方案。該液相色譜系統由以下模塊組成，固件版本 A.06.01 或更高：• Agilent 1200 系列 SL 型二元泵，配置脫氣機• Agilent 1200 系列 SL plus 高效自動進樣器• 2 個 Agilent 1200 系列 SL plus 柱溫箱(G1316C)，已安裝閥驅動• 安捷倫方法開發閥工具包，高壓• 安捷倫方法開發毛細管工具包，低擴散，適用于短柱• Agilent 1200 系列 SL 型二極管陣列檢測器（DAD）• 幾根 Agilent ZORBAX 快速分離高通量（RRHT）色譜柱，1.8 µm 填料粒徑• 安捷倫化學工作站 B04.01，含安捷倫化學工作站方法篩選向導樣品制備2 片含藥 50 mg 的倍他樂克片，分別研磨，并 80 °C 加熱 3 小時。殘渣溶解于 4 mL 水中。用 2 支注射式過濾器去除不溶性顆粒– 先用 Minisart 0.8 µm 過濾器，然后用安捷倫 0.45 µm 過濾器。進樣 1 微升濾液至液相色譜系統。
結果和討論安捷倫化學工作站方法篩選向導安捷倫化學工作站方法篩選向導是安捷倫化學工作站的附加軟件。用于以簡便而合理的方式生成方法和序列表，以篩選選定的色譜柱、溶劑、預設梯度和溫度。方法篩選實驗的設置包括幾步：
• 創建新的篩選實驗（圖 1）這一步包括為實驗和其根文件夾命名并加以說明，通常這是設置一個新實驗的開端。或者也可以調用或修改預定義的篩選實驗。當最初方法篩選的標準化步驟必須用新樣品重復時，這種方式將非常有用。
• 確定篩選實驗（圖 2）這一步包括選擇主要方法和實驗范圍。在篩選過程中所有保持不變的參數（例如，檢測器設置）均來自主要方法。
• 設置色譜柱篩選（圖 3）在這個屏幕上，選擇了要評價的色譜柱。這里列出的色譜柱必須在儀器界面中的更多柱溫箱組合>配置色譜柱屏幕中預先確定>，這樣才能被安捷倫化學工作站方法篩選向導自動識別。
• 設置溶劑選擇（圖 4）安捷倫化學工作站方法篩選向導識別系統中有哪種類型的泵（二元泵或四元泵）。還要確定是外部溶劑選擇閥（G1160A）還是內部溶劑選擇閥（只用于二元泵）。軟件中顯示的溶劑為其預先定義的名字。
