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超液相色譜儀的發(fā)展值得期待
閱讀：1047 發(fā)布時(shí)間：2015-9-25
超液相色譜儀的發(fā)展值得期待
超液相色譜儀是分離科學(xué)中的一個(gè)全新類別，UPLC借助于HPLC(液相色法)的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超液相色譜儀是一個(gè)新興的領(lǐng)域，作為世界*個(gè)商品化UPLC產(chǎn)品的Waters ACQUITY UPLCTM 超液相色譜儀系統(tǒng)在1996年問世，之后像安捷倫、島津等公司也陸續(xù)開始生產(chǎn)超色譜儀。目前，超液相色譜儀已經(jīng)開始逐漸地投入液相實(shí)驗(yàn)中。
超液相色譜儀法的原理與超液相色譜儀法基本相同，所改變的地方有以下幾點(diǎn):
小顆粒、高性能微粒固定相的出現(xiàn)。 超液相色譜儀的色譜柱，例如常見的十八烷基硅膠鍵合柱，它的粒徑是5um，而超液相色譜儀的色譜柱，會(huì)達(dá)到3.5um，甚至1.7um。這樣的孔徑更加利于物質(zhì)分離
(2)超高壓輸液泵的使用。
由于使用的色譜柱粒徑減小，使用時(shí)所產(chǎn)生的壓力也自然成倍增大。故液相色譜的輸液泵也相應(yīng)改變成超高壓的輸液泵。
(3)高速采樣速度的靈敏檢測(cè)器。
(4)使用低擴(kuò)散、低交叉污染自動(dòng)進(jìn)樣器。配備了針內(nèi)進(jìn)樣探頭和壓力輔助進(jìn)樣技術(shù);
(5)超液相色譜儀整體系統(tǒng)優(yōu)化設(shè)計(jì)。色譜工作站配備了多種軟件平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)超液相分析方法與液相分析方法的自動(dòng)轉(zhuǎn)換。
超液相色譜儀與傳統(tǒng)的HPLC相比，UPLC的速度、靈敏度及分離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它縮短了分析時(shí)間，同時(shí)減少了溶劑用量降低了分析成本。
不過由于實(shí)驗(yàn)過程中儀器內(nèi)部壓力過大，也會(huì)產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的問題。例如泵的使用壽命會(huì)相對(duì)降低，超液相色譜儀的連接部位老化速度加快，包括單向閥等部位零件容易出現(xiàn)問題等。
超液相色譜儀尤其對(duì)中藥研究領(lǐng)域的發(fā)展是一個(gè)極大的促進(jìn)。中藥的組分復(fù)雜，分離困難等問題都可以通過超液相色譜儀法逐漸解決。在同樣條件下，UPLC能分離的色譜峰比HPLC多出一倍還多。在同樣條件下，UPLC的分辨率能夠認(rèn)出更多的色譜峰。
相信在分析實(shí)驗(yàn)室中超液相色譜儀會(huì)越來越普及，讓液相色譜法得到飛躍和進(jìn)步。
超液相色譜儀是目前應(yīng)用zui多的色譜分析方法，超液相色譜儀系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn)；進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利切換嚴(yán)密；由于液體流動(dòng)相粘度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣體，為了減低柱壓超液相色譜儀的色譜柱一般比較粗，長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。HPLC應(yīng)用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
使用超液相色譜儀時(shí)，液體待檢測(cè)物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動(dòng)，由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào)，zui后通過分析比對(duì)這些信號(hào)來判斷待側(cè)物所含有的物質(zhì)。超液相色譜儀作為一種重要的分析方法，超液相色譜儀廣泛的應(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。超液相色譜儀從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差別，超液相色譜儀的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測(cè)器和微粒固定相，適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機(jī)化合物。
超液相色譜儀主要特點(diǎn)
高壓——壓力可達(dá)150～300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上。
高速——流速為0.1～10.0 mL/min。
——塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度——紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：
速度快——通常分析一個(gè)樣品在15～30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到*分離效果。
靈敏度高——紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。
色譜柱可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。