酶聯免疫吸附實驗(ELISA)已經成為實驗室常用的檢測蛋白含量變化的實驗技術,常用的檢測方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標記的話,那將會需要多少種標記的抗體呢?而且可以肯定價格一定不菲。而用標記二抗的方法就可以大大減少需要標記抗體的數目,同時也能提高標記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標記抗體滿足盡量多的實驗要求。
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●穩定轉染●:即進入細胞的質粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。這是相對瞬時轉染而言的。瞬時轉染的表達時間短暫,外源基因導入整合基因組的幾率非常低,絕大部分以游離形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制,導致后拷貝數被稀釋,無法達到持續表達外源基因的目的。一般用轉染試劑進行質粒轉染,多為瞬時轉染。 ●一般如下情況需要構建穩定株●: 1. 長期在目的細胞中研究基因功能,通過構建穩定株,可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本,也極大方便實驗研究; 2. 部分蛋白半衰期極長,瞬時 RNA 只能干擾表達,無法去除已經表達的目的蛋白,通過構建穩定株可以實現更好的基因干擾效果; 3. 瞬轉往往會引入*拷貝數的表達,導致因為人為因素造成實驗結果的不,構建穩定株可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究; 4. 需要用誘導表達系統的,主要是一些致死基因或者是需要時空表達的; 5. 需要用細胞做動物實驗的,比如裸鼠成瘤等,往往需要構建成穩轉株。
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編輯:小檀20181010
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