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Peps6捕獲BAC試劑盒

Peps6捕獲BAC試劑盒 

描述：

Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數(shù)樣本中進(jìn)行細(xì)菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開(kāi)發(fā)的緩沖液，以確保優(yōu)良的細(xì)菌捕獲。 根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將樣本稀釋在緩沖液中，然后加入磁珠。經(jīng)過(guò)短暫的振蕩孵育后，去除上清液，同時(shí)磁鐵（不提供）將磁珠固定在下方。然后細(xì)菌在磁珠上濃縮，并且沒(méi)有潛在的抑制劑。它們可以用常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行分析。 該產(chǎn)品的保質(zhì)期為2年，保存在2-8°C。該產(chǎn)品有25或50測(cè)試格式可供選擇。

參考編號(hào)：MP10031-50T

• 數(shù)量：50次測(cè)試

成分：

• 1 mL的Peps6磁珠（編號(hào)：MP20006-1ML）

• 50毫升緩沖液TTGB 10X（編號(hào)：TP10004-50ML）

Peps6-捕獲BAC試劑盒

描述：

Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數(shù)樣本中進(jìn)行細(xì)菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開(kāi)發(fā)的緩沖液，以確保優(yōu)良的細(xì)菌捕獲。 根據(jù)試劑盒說(shuō)明，將樣本稀釋在緩沖液中，然后加入磁珠。經(jīng)過(guò)短暫的振蕩孵育后，去除上清液，同時(shí)磁鐵（不提供）將磁珠固定在下方。然后細(xì)菌在磁珠上濃縮，并且沒(méi)有潛在的抑制劑。它們可以用常規(guī)檢測(cè)方法進(jìn)行分析。 該產(chǎn)品的保質(zhì)期為2年，保存溫度為2-8°C。該產(chǎn)品有25或50測(cè)試格式可供選擇。

參考編號(hào)：MP10031-25T

• 數(shù)量：25次檢測(cè)

成分：

• 0.5 mL的Peps6磁珠（參考編號(hào)：MP20006-0.5ML）

• 25 毫升緩沖液 TTGB 10X（參考編號(hào)：TP10004-25ML）

1. 簡(jiǎn)介

合成分子 Peps6 源自載脂蛋白 H（ApoH），保留了其結(jié)合微生物的能力，包括病毒（1-2）、真菌（3）和細(xì)菌（4-6）。ApoH 蛋白也稱(chēng)為載脂蛋白 H 或 β2 - 糖蛋白 1，其多特異性允許對(duì)多種微生物進(jìn)行多重捕獲。這種親和捕獲方法簡(jiǎn)單、溫和且快速，可使微生物保持活力和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離，從而更易通過(guò)常規(guī)特異性技術(shù)（如 PCR、ELISA 等）進(jìn)行鑒定 / 檢測(cè)，顯著提升靈敏度（7-10）。
這些特性使 Peps6-CaptoBAC 試劑盒成為一種創(chuàng)新的樣品預(yù)處理工具，用于細(xì)菌分離，以便進(jìn)行高靈敏度的鑒定 / 檢測(cè)。

2. 123原理

在 Peps6-CaptoBAC 試劑盒中，Peps6 與磁珠結(jié)合。試劑盒提供一種特殊結(jié)合緩沖液，可增強(qiáng) Peps6 對(duì)細(xì)菌的親和力。將 Peps6 磁珠加入任何復(fù)雜生物樣本中（用提供的緩沖液稀釋?zhuān)瑯颖局械某跏茧s質(zhì)和潛在抑制劑可被去除，而通過(guò) Peps6 與磁珠結(jié)合的細(xì)菌則通過(guò)磁鐵保留在試管中。隨后，細(xì)菌可通過(guò)分子技術(shù)（PCR）、免疫檢測(cè)（ELISA、WB）或在合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)等方法進(jìn)行鑒定 / 檢測(cè)。

3. 45試劑

REF MP20006 – Peps6 磁珠
合成 Peps6 包被的磁珠懸浮液濃度為1013個(gè)珠子 / 毫升，珠子直徑約 200 nm，緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉。
REF TP1006704 – TTGB 10X 緩沖液
TTGB 10X 緩沖液為淺黃色水性結(jié)合緩沖液，經(jīng) 0.2 µm 過(guò)濾，濃縮 10 倍，使用前需按說(shuō)明稀釋。
注意：試劑盒中89的所有試劑均可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)。

4. 10存儲(chǔ)

• 所有試劑可在室溫下運(yùn)輸，功能不受影響；收到后需存儲(chǔ)于           2-8°C。

• 所有試劑在 2-8°11C 下可穩(wěn)定保存至有效期。

• Peps6 磁珠瓶需12直立存放，確保磁珠始終浸沒(méi)在存儲(chǔ)液中。

• 使用后，所有試劑需13迅速放回 2-8°C 存儲(chǔ)。

5. 14所需材料（未提供）

• 無(wú)菌蒸餾水。

• 合適的微量移液器和無(wú)菌濾芯吸頭。

• 合適的反應(yīng)管（玻璃或聚丙烯塑料材質(zhì)，避免聚苯乙烯）。

• 孵育過(guò)程中用于樣品15攪拌的設(shè)備。

• 溫控培養(yǎng)箱。

• 層流罩或目標(biāo)微生物所需的特定微生物環(huán)境。

• 與試管兼容的側(cè)向磁16吸裝置（注意：不同市售磁鐵的吸引力和速度可能不同）。

• 目標(biāo)微生物檢測(cè)所需17的材料和試劑。

6. 18安全注意事項(xiàng)

• 為確保穩(wěn)定性，所有試劑需小心處理，避免污染。

• 是否需要無(wú)菌操作區(qū)19域取決于捕獲微生物的用途（如需培養(yǎng)則必須無(wú)菌）。

• Peps6 磁珠存儲(chǔ)20緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉，痕量疊化鈉不影響捕獲或微生物活力，使用前無(wú)需清洗磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道反應(yīng)生成爆炸性疊氮化物，通過(guò)管道處理時(shí)需用大量水沖洗，防止疊氮化物堆積。

• 試劑和樣本需按照良21好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范處理，未使用的試劑、樣本和廢棄物需按當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置。

• 請(qǐng)勿使用過(guò)期試劑。22

7. 23重要提示

本方案為最多 5 mL 樣本中細(xì)菌結(jié)合的通用指南，根據(jù)細(xì)菌菌株、樣本性質(zhì)和體積，可能需要進(jìn)一步優(yōu)化以實(shí)現(xiàn)優(yōu)良結(jié)合能力。
ApoH 捕獲機(jī)制不同于24常規(guī)抗原 - 抗體相互作用，如需確保實(shí)驗(yàn)成功，請(qǐng)聯(lián)系我們的技術(shù)支持。
捕獲細(xì)菌前，Peps62526磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、高溫（>60°C）或端 pH（>9 或 < 5）處理。若需保留微生物活力，捕獲后也需遵循同樣注意事項(xiàng)。

• 若懷疑微生物負(fù)載較27高，可增加磁珠體積。磁珠可結(jié)合大量微生物：1 µL 磁珠可從純培養(yǎng)物中結(jié)合1×107個(gè)大腸桿菌。

8. 28樣本采集與處理

現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明，Peps6 磁珠可捕獲各種固體（懸浮后）或液體樣本中的細(xì)菌。

• 固體樣本（如肉類(lèi)、29組織）需在 1X 捕獲緩沖液中研磨，過(guò)濾后再加入磁珠，否則磁珠可能被樣本顆粒卡住，無(wú)法磁化。

• 優(yōu)先使用新鮮樣本，30避免混合樣本。混合血液、血清或血漿可能形成凝塊，捕獲并聚集磁珠，使其無(wú)法結(jié)合微生物。

• 若進(jìn)行細(xì)菌添加實(shí)驗(yàn)31，需使用臨床菌株而非 “標(biāo)準(zhǔn)菌株”（如 ATCC 菌株），許多標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì) ApoH 蛋白或 Peps6 分子的親和力會(huì)下降。

• 使用全血時(shí)，需選擇32EDTA 抗凝劑。

• 所有稀釋或處理后的33樣本需迅速與 Peps6 磁珠接觸。

• 樣本體積可按比例調(diào)34整，若懷疑微生物滴度較低，可擴(kuò)大樣本體積。超過(guò) 5 mL 的樣本，需聯(lián)系技術(shù)支持。
            受損微生物可能失去對(duì) A35poH 蛋白或      Peps6 分子的親和力，因此：

• 優(yōu)先使用新鮮樣本材料。

• 檢查冷凍樣本中細(xì)菌36的活力，避免樣本反復(fù)凍融。

• 使用劣質(zhì)樣本會(huì)導(dǎo)致37靈敏度下降。

9. 38使用說(shuō)明

樣本在捕獲緩沖液中的稀釋
將樣本稀釋于捕獲緩沖液中并渦旋，稀釋后緩沖液終濃度必須為 1X：

• 小體積樣本（1-199 µL）：將 TTGB 10X 緩沖液用無(wú)菌蒸餾水稀釋至 1X，加入足夠的 1X TTGB 緩沖液，使樣本總體積達(dá)到 1      mL。

• 大體積樣本（039.2-5.0 mL）：將 TTGB 10X 緩沖液用無(wú)菌蒸餾水稀釋至 2X，按 1:1 體積比加入樣本中。

捕獲步驟 40

• 使用前，通過(guò)輕柔吹打或手動(dòng)倒置底重懸 Peps6 磁珠（切勿渦旋）。

• 每個(gè)樣本加入 20 41µL      Peps6 磁珠。

• 輕輕混勻（切勿渦旋42）。

• 在 35-37°C 下43適當(dāng)攪拌孵育 30 分鐘：試管需直立并劇烈攪拌，使磁珠保持懸浮狀態(tài)（如設(shè)置 Thermomixer 為 1000 rpm）。

• 將反應(yīng)管置于磁鐵上44，直至所有磁珠側(cè)向沉淀且上清液澄清。

• 棄去上清液，避免擾45動(dòng)磁珠沉淀，細(xì)菌即濃縮于沉淀中。

洗滌（可選）46
純培養(yǎng)物、血漿或血清無(wú)需洗滌，全血等復(fù)雜樣本可能需要洗滌：

• 向磁鐵上的磁珠沉淀中輕輕加入 1 mL      PBS（不含Ca2+/Mg2+），勿重懸磁珠。

• 棄去上清液，避免擾47動(dòng)沉淀。

• 如需可重復(fù)洗滌一次48。

10.49 細(xì)菌檢測(cè)

結(jié)合的細(xì)菌可直接在 Peps6 磁珠上通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方案檢測(cè)（必要時(shí)可調(diào)整）。注意：小體積樣本需在加入重懸液前短暫離心磁珠沉淀。

• 培養(yǎng)：將磁50珠重懸于合適培養(yǎng)基中，直接涂布于培養(yǎng)皿，在細(xì)菌適宜溫度下孵育。

• PCR：將51磁珠重懸于裂解緩沖液中，劇烈渦旋 15 秒以破壞沉淀。裂解后，通過(guò)磁鐵或離心（10,000 g，1 分鐘）去除磁珠，轉(zhuǎn)移上清液至新管，按常規(guī)流程提取 DNA 并進(jìn)行 PCR。

• 顯微鏡觀察52：將磁珠重懸于 PBS 或特定培養(yǎng)基中，磁珠無(wú)自發(fā)熒光，可用于熒光檢測(cè)。

• 其他方法：53將磁珠重懸于適當(dāng)溶液中，如需其他特定應(yīng)用，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持。

11.54 故障排除

以下為常見(jiàn)問(wèn)題指南，如需進(jìn)一步幫助或定制方案，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持。
磁珠和緩沖液處理55

• 需在無(wú)菌環(huán)境中打開(kāi) Peps6 磁珠瓶，污染會(huì)降低穩(wěn)定性和效率。

• 必須將磁珠加入樣本56中，而非反向操作。

• 使用無(wú)菌蒸餾水稀釋57緩沖液，確保混合后 TTGB 緩沖液為 1X 濃度。

• 檢查 TTGB 緩沖液58是否污染。

• 根據(jù)微生物或樣本類(lèi)59型，可優(yōu)化捕獲緩沖液的選擇和用量。

大體積樣本 60

• 5-100 mL 大體積樣本需額外購(gòu)買(mǎi)磁珠和緩沖液。

• 樣本稀釋?zhuān)褐苯蛹尤?span>612X 或 10X 濃縮的 TTGB 緩沖液，使終濃度為 1X。

• 每個(gè)樣本加入 20 62µL 磁珠，超過(guò) 10 mL 的樣本可能需要增加磁珠體積。

• 超過(guò) 20 mL 的樣63本可采用軌道攪拌（設(shè)置為 3 rpm）代替直立攪拌。

• 大體積樣本需預(yù)溫至64室溫或孵育溫度后再加入磁珠。

孵育
-65 嚴(yán)格遵循溫度和時(shí)間以確保優(yōu)良結(jié)果。

• 選擇足夠大的試管以66保證充分?jǐn)嚢瑁ㄈ?span> 1 mL 反應(yīng)用 1.5 mL 試管）。

• 試管需直立并劇烈攪67拌（如 1000 rpm），使用玻璃或聚丙烯試管，避免聚苯乙烯。

磁化
-6869 若上清液中殘留磁珠或沉淀被吸頭擾動(dòng)，需延長(zhǎng)磁化時(shí)間（細(xì)胞培養(yǎng)樣本通常 2 分鐘，全血樣本可達(dá) 15 分鐘）。

• 使用高能釹磁鐵（870-12 kg 吸引力）確保磁珠全磁化，磁力過(guò)低會(huì)導(dǎo)致磁珠和微生物損失，過(guò)強(qiáng)可能使磁珠嵌入塑料管。

• 吸棄上清液前需去除71氣泡。

• 磁化時(shí)間不得超過(guò) 3720 分鐘，以免破壞微生物完整性。

洗滌
-73 細(xì)胞上清液、血漿或血清無(wú)需洗滌（除非檢測(cè)系統(tǒng)高度敏感），全血等復(fù)雜樣本可能需要洗滌 2 次，洗滌時(shí)需在磁鐵上操作，切勿渦旋。

• PBS 可替換為其他74洗滌緩沖液，需聯(lián)系技術(shù)支持確認(rèn)兼容性。

檢測(cè)
-75 部分細(xì)菌捕獲后無(wú)法培養(yǎng)（處于活但不可培養(yǎng)狀態(tài)），需通過(guò)顯微鏡或 PCR 驗(yàn)證捕獲效果。

• 裂解步驟至關(guān)重要，76裂解緩沖液效率取決于化學(xué)組成，建議添加裂解對(duì)照，可劇烈渦旋磁珠以確保裂解充分。

• 如需光密度測(cè)量，需77用磁鐵去除磁珠，僅檢測(cè)上清液（磁珠呈深棕色，會(huì)嚴(yán)重干擾光學(xué)測(cè)量）。

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