蛋白質(zhì)組學(xué)時(shí)代的C末端序列分析方法檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

隨著dànbáizhì組學(xué)的發(fā)展，C末端序列分析變得越來越重要。C末端決定了許多蛋白的功能、穩(wěn)定性、亞細(xì)胞定位及相互作用，且往往受到翻譯后修飾（PTMs）或特異性剪切的調(diào)控。然而，與N端序列測定相比，C末duāncèxù面臨更大的技術(shù)挑戰(zhàn)，因?yàn)槟壳皼]有類似Edman降解的化學(xué)降解方法用于C端逐步測序。隨著質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展和生物信息學(xué)工具的優(yōu)化，dànbáizhì組學(xué)時(shí)代的C末duāncèxù已取得顯著進(jìn)展。本文將重點(diǎn)介紹當(dāng)前C末端序列分析的主要方法，包括酶解法、化學(xué)標(biāo)記法、質(zhì)譜法及其在dànbáizhì組學(xué)中的應(yīng)用。

一、C末duāncèxù方法的局限性

C末端序列分析傳統(tǒng)上依賴于羧肽酶降解法（Carboxypeptidase degradation），該方法利用特定的羧肽酶從C末端依次切割氨基酸，并通過檢測釋放的氨基酸序列推測C末端序列。然而，該方法存在局限性：

1、羧肽酶特異性限制

不同類型的羧肽酶（如Carboxypeptidase A/B/Y）具有特定的切割偏好，并不能普遍適用于所有蛋白。

2、C末端修飾影響

dànbáizhì的C末端常伴隨酰胺化、磷酸化、糖基化等修飾，這些修飾會阻礙羧肽酶的切割，導(dǎo)致序列解析失敗。

3、低效和低通量

逐步水解的過程緩慢，并且通常只能測定短序列（≤5個(gè)氨基酸），難以適用于大規(guī)模dànbáizhì組學(xué)分析。

鑒于上述限制，dànbáizhì組學(xué)時(shí)代需要更高效、靈敏度更高的C末duāncèxù方法，以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模蛋白的C端表征。

二、現(xiàn)代C末端序列分析方法

1、基于質(zhì)譜的C末duāncèxù

質(zhì)譜技術(shù)（Mass Spectrometry, MS）已成為dànbáizhì組學(xué)時(shí)代C末端序列分析的主流方法。基于質(zhì)譜的C末端分析主要包括Bottomup MS、Topdown MS 和Middledown MS策略。

（1）Bottomup MS：Bottomup質(zhì)譜通過特定的蛋白酶消化dànbáizhì，再結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LCMS/MS）分析肽段，其中C端特異性酶（如AspN、GluC）能夠產(chǎn)生更易檢測的C端肽段。然而，該方法的一個(gè)主要挑戰(zhàn)在于酶解過程中C端片段可能被部分或wánquán丟失，導(dǎo)致無法完整解析C末端序列。

（2）Topdown MS：Topdown質(zhì)譜能夠直接分析完整蛋白，避免了蛋白酶解步驟的限制。通過高能碎裂（CID、HCD、ETD等）技術(shù)，完整蛋白在質(zhì)譜中產(chǎn)生特征性離子，使得C端序列可以直接解析，同時(shí)還能夠檢測翻譯后修飾，如酰胺化或糖基化。然而，該方法對質(zhì)譜儀的分辨率要求較高，僅適用于低復(fù)雜度的樣品。

（3）Middledown MS：Middledown質(zhì)譜策略采用部分酶解保留較長的C端片段，以提高測序覆蓋度，同時(shí)減少Bottomup策略中C端片段丟失的問題。

2、化學(xué)標(biāo)記法

化學(xué)標(biāo)記法利用C末端羧基基團(tuán)的反應(yīng)特性，特異性地修飾C端并結(jié)合質(zhì)譜檢測。近年來，Click Chemistry技術(shù)也被用于C端標(biāo)記，結(jié)合LCMS/MS分析，提高了檢測的穩(wěn)定性和靈敏度。這些化學(xué)標(biāo)記方法在某些情況下能夠有效提升C末duāncèxù的效率，但也面臨標(biāo)記效率受dànbáizhì結(jié)構(gòu)影響、反應(yīng)不wánquán等問題，仍需優(yōu)化和改進(jìn)。

三、dànbáizhì組學(xué)時(shí)代C末duāncèxù的應(yīng)用

C末端序列分析在dànbáizhì組學(xué)中的應(yīng)用廣泛，尤其是在蛋白降解機(jī)制研究、翻譯后修飾解析和生物制藥質(zhì)量控制等方面發(fā)揮著重要作用。C末端的序列信息能夠揭示泛素蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）中的底物降解特征，從而幫助理解蛋白穩(wěn)定性和降解途徑。例如，在神經(jīng)退行性疾病研究中，某些異常蛋白的C末端截短與疾病進(jìn)展密切相關(guān)，因此解析C端序列有助于揭示其病理機(jī)制。此外，C末端的翻譯后修飾，如酰胺化或磷酸化，在蛋白功能調(diào)控中起到關(guān)鍵作用，質(zhì)譜技術(shù)能夠jīngzhǔn檢測這些修飾狀態(tài)，為dànbáizhì功能研究提供更多信息。在生物制藥領(lǐng)域，C端序列的準(zhǔn)確性直接影響蛋白藥物的生物學(xué)活性和穩(wěn)定性。以單克隆抗體（mAbs）為例，C末端的截短或異常修飾可能會導(dǎo)致蛋白折疊異常，從而影響其療效和安全性。因此，在生物藥物研發(fā)和質(zhì)量控制中，C末端序列分析已成為確保藥物一致性和穩(wěn)定性的關(guān)鍵技術(shù)。

隨著dànbáizhì組學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，未來C末端序列分析方法將進(jìn)一步優(yōu)化，以滿足更高通量、更高靈敏度的分析需求。高分辨率質(zhì)譜儀的持續(xù)升級，如Orbitrap和FTICRMS，將大幅提升C末端肽段的檢測能力。同時(shí)，人工智能和深度學(xué)習(xí)技術(shù)的應(yīng)用將極大提高C末端序列鑒定的準(zhǔn)確性，通過機(jī)器學(xué)習(xí)優(yōu)化碎裂模式和肽段匹配，提高數(shù)據(jù)分析的效率。此外，新型化學(xué)標(biāo)記和富集策略的開發(fā)，將進(jìn)一步增強(qiáng)C端肽段的檢測靈敏度，使其在復(fù)雜dànbáizhì組樣本中的應(yīng)用更加廣泛。百泰派克生物科技提供zhuānyè的dànbáizhìN/Cduāncèxù服務(wù)，可解決您的項(xiàng)目問題，加速您的研究項(xiàng)目，為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)體驗(yàn)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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