BR6026 磷脂酶D試劑盒 脂肪酸系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) BR6026
- 產(chǎn)地 北京
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/4/9 16:47:45
- 訪問(wèn)次數(shù) 72
聯(lián)系方式：趙樂(lè)瑤13269192980 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | BR6026 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能 |
磷脂酶D（ Phospholipases D，PLD ）試劑盒說(shuō)明書
微量法 100T/96S
磷脂酶D試劑盒 脂肪酸系列
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰dan堿水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。
測(cè)定原理：
磷脂酶D 催化水解磷脂酰dan堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和dan堿，dan堿在dan堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化氫酶的作用下將 4-氨基安ti比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在 500nm 處有特征吸收峰。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BR6026-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 102ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 3ml | 4℃避光 |
試劑三：粉劑 | 1 支 | -20℃避光 |
試劑四：液體 | 15ml | 4℃避光 |
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 | 1ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書 | 一份 | |
試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加 1ml 無(wú)水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、無(wú)水乙醇。
酶液提取：
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后于 4℃，10000g離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1ml 試劑一。
血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 | |
試劑一（μl） | 20 | ||
試劑二（μl） | 30 | 30 | 30 |
標(biāo)準(zhǔn)品（μl） | 20 | ||
樣品（μl） | 20 | ||
試劑三（μl） | 10 | 10 | 10 |
充分混勻，30℃反應(yīng) 30min，沸水浴 1min，打開蓋子，自然冷卻 2min。 | |||
試劑四（μl） | 140 | 140 | 140 |
30℃反應(yīng) 30min，于微量石英比色皿/96 孔板，空白管調(diào)零，測(cè)定 500nm 處吸光值，分 別記為A 標(biāo)準(zhǔn)管和A 測(cè)定管。 | |||
酶活計(jì)算公式：
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /mg prot）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr÷T= 16.7× A測(cè)定管 ÷Cpr
按照樣本質(zhì)量計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位
PLD 活性（nmol/min /g 鮮重）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T = 16.7× A測(cè)定管 ÷W
按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /104 cell）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7× A測(cè)定管 ÷細(xì)胞數(shù)量
按照液體體積計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /ml）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷T=16.7× A測(cè)定管
A標(biāo)準(zhǔn)管 A標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，500nmol/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /mg prot）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr÷T= 16.7× A測(cè)定管 ÷Cpr
按照樣本質(zhì)量計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /g 鮮重）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T = 16.7× A測(cè)定管 ÷W
按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /104 cell）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7× A測(cè)定管 ÷細(xì)胞數(shù)量按照液體體積計(jì)算
A標(biāo)準(zhǔn)管
A標(biāo)準(zhǔn)管
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰dan堿產(chǎn)生 1nmol dan堿所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLD 活性（nmol/min /ml）=
A測(cè)定管 ×C 標(biāo)準(zhǔn)÷T=16.7× A測(cè)定管
A標(biāo)準(zhǔn)管 A標(biāo)準(zhǔn)管
C 標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，500nmol/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
注意事項(xiàng)：
顯色完成后，若有沉淀，于 8000rpm，25℃離心 5min 后取上清測(cè)定。
吸光值不宜超過(guò) 1，否則用試劑一將酶液進(jìn)行稀釋，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
磷脂酶D試劑盒 脂肪酸系列
采購(gòu)中心
化工儀器網(wǎng)