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色譜柱常見問題(一)
2020年06月02日 14:17:09 來源:化工儀器網(wǎng) 點(diǎn)擊量:6235

色譜柱是色譜的重要配件,了解色譜柱有助于我們更好的使用色譜儀。

  【化工儀器網(wǎng) 技術(shù)指導(dǎo)色譜柱是色譜的重要配件,了解色譜柱有助于我們更好的使用色譜儀。
 
  1、色譜柱的柱子是否可以反沖?什么樣的柱子可以反沖,什么不可以?反沖后是正著用,還是反著用?
 
  一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖,不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,反沖后還是正著用比較好,以免柱子的兩頭都被污染。因此,我們提倡正向使用,反向沖洗。
 
  2、拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)?為什么要這樣做?
 
  新柱活化實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程,除了用流動(dòng)相平衡外,有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡,特別是測(cè)定分子量比較高的多肽時(shí)。平衡方式即多進(jìn)幾次樣品,直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定,再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。如果要加快平衡時(shí)間,把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,或者不等洗脫完成,連續(xù)進(jìn)樣多針。
 
  用待測(cè)物對(duì)新柱平衡,目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和。
 
  3、測(cè)定多肽,一般采用什么柱子?
 
  分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定。也可以用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱。
 
  4、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?
 
  氨基柱測(cè)酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。使用后,用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱,沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨。
 
  5、柱子在什么情況下可以清洗篩板呢?
 
  柱頭污染了,就取出污染的,再裝一些填料。
 
  5、如果柱子取下來放置一段時(shí)間,需要做什么保護(hù)嗎?
 
  對(duì)一般的反相柱,需要在洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發(fā)。不需要做特殊的保護(hù)。
 
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