抗原的制備方法:
(1)組織和細胞粗抗原的制備 將新鮮或超低溫保存的樣品組織清洗干凈后,剪成小塊后進行粉碎,常用的粉碎方法有高速組織搗碎機法和研磨法,粉碎后的組織勻漿液離心后上清液中就含有可提取可溶性抗原的材料――粗抗原。
(2)組織細胞可溶性抗原的制備 可用于制備抗原用的細胞包括正常細胞、病理細胞或傳代細胞。制備抗原時需將細胞破碎后釋放出抗原。制備方法有反復凍融法、冷熱交替法、超聲破碎法、自溶法、溶菌酶處理法等。
(3)超速離心和梯度密度離心法 超速離心是分離亞細胞部分及蛋白質大分子是有效手段,它又分為差速離心和梯度離心。離心純化抗原的方法是依據抗原的比重特點進行分離,目前僅適用于少部分大分子抗原,如IgM、C19、甲狀腺蛋白等;對于大量的中、小分子量蛋白質,多不適合用離心的方法進行分離純化。
(4)選擇性沉淀法 選擇性沉淀是采用各種沉淀劑或改變某些條件促使抗原成分沉淀,從而達到純化的目的,主要包括鹽析沉淀法、有機溶劑沉淀法、水溶性非離子型聚合物沉淀法等。
(5)親和色譜、凝膠過濾和離子交換色譜 采用各種色譜手段,可將某種蛋白質從復雜組分中純化出來。
(6)純化抗原的鑒定 常用的方法有聚丙烯胺凝膠電泳法、結晶法、免疫電泳法、免疫雙擴散法等。一般常把幾種方法聯合使用才能判斷出可靠的結果。
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。