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文章標(biāo)題：MOLT-4細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)
關(guān)鍵詞：MOLT-4細(xì)胞培養(yǎng)，MOLT-4細(xì)胞價(jià)格，MOLT-4細(xì)胞來(lái)源背景，MOLT-4細(xì)胞，細(xì)胞株培養(yǎng)
中文名稱：人淋巴母細(xì)胞白血病
生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮生長(zhǎng)
1.試劑和溶液
1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇
2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B
3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20
4）封閉液：TBST配制的5%牛奶
5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶
6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色
2.實(shí)驗(yàn)步驟
1電泳：將裂解液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，80v，30分鐘，120v，90分鐘；
2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，10v，150分鐘；
3染色：氨基黑染色5分鐘，甲醇褪去背景色，觀察條帶；
4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；
5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中，室溫混搖2h；
6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說(shuō)明書，根據(jù)客戶預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，稀釋度上下浮動(dòng)一個(gè)數(shù)量級(jí)都為正常），將膜放入對(duì)應(yīng)的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜；
7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；
8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標(biāo)記的二抗（參照二抗說(shuō)明書進(jìn)行稀釋）中，室溫混搖2h；
9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；
10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標(biāo)的膠片上，迅速用保鮮膜包好；
11曝光：把底片放在暗盒中，根據(jù)熒光強(qiáng)度分別對(duì)X光膠片作不同時(shí)間段的曝光，曝光結(jié)束后，將底片取出，1min顯影，30s清洗，1min定影，30s清洗，晾干；
12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描，做后續(xù)結(jié)果分析。
選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過(guò)滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。
注意:細(xì)胞株的生物等級(jí)，由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品，所以從國(guó)外購(gòu)貨比較麻煩。
形態(tài)學(xué)改變:細(xì)胞體積明顯增大,為成熟淋巴細(xì)胞3-4倍。核膜清晰,核染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀。核內(nèi)見明顯核仁1-4個(gè)。胞漿豐富,嗜堿性,有偽足樣突出。胞漿內(nèi)有時(shí)可見小空泡。
細(xì)胞培養(yǎng)是一種無(wú)菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無(wú)煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無(wú)菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。
生物試劑銷售中心細(xì)胞庫(kù)ATCC/ScienCell細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)|細(xì)胞培養(yǎng)基 *的ATCC細(xì)胞，ATCC傳代細(xì)胞，sciencell細(xì)胞，sciencell原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，原代細(xì)胞培養(yǎng)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，植物細(xì)胞培養(yǎng)提供者。 細(xì)胞培養(yǎng)基 主要經(jīng)營(yíng)品牌有ATCC，ScienCell，DSMZ，ALLCELLS，DV Biologics，Stemgent等，其中ATCC/ScienCell細(xì)胞zui為，傳代細(xì)胞，復(fù)蘇細(xì)胞，第二代細(xì)胞等，*，買的放心，做實(shí)驗(yàn)也放心，歡迎訂購(gòu)！
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選擇試劑銷售的理由：
高質(zhì)量ATCC·ScienCell·DSMZ等產(chǎn)品對(duì)您的研究非常重要
所有細(xì)胞入庫(kù)之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)和鑒定
所有細(xì)胞在出庫(kù)之前均經(jīng)過(guò)一次嚴(yán)格的質(zhì)檢認(rèn)證
確保細(xì)胞到每一位用戶手里都是狀態(tài)
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，膜磷脂酰絲氨酸外翻的發(fā)生早于細(xì)胞核的變化，而此時(shí)Propidium Iodide（PI）不能通過(guò)細(xì)胞膜。
細(xì)胞壞死時(shí)，雖然也會(huì)發(fā)生磷脂酰絲氨酸外翻，但此時(shí)細(xì)胞膜的通透性明顯增加，PI等核酸染料進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞核中的核酸結(jié)合，發(fā)出紅色熒光。所以Annexin V-FITC(綠色熒光)常與鑒定細(xì)胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，來(lái)區(qū)分凋亡細(xì)胞與死亡細(xì)胞。
技術(shù)原理及步驟
1. 離心收集細(xì)胞，微量離心機(jī)轉(zhuǎn)速1000 rpm，離心時(shí)間5 min，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。
3. 用400 μL1× Binding Buffer懸浮細(xì)胞，濃度大約為1×106 cells/mL。
4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC，輕輕混勻后于2~8°C避光條件下孵育15min。
5. 加入10 μL PI后輕輕混勻于2~8°C避光條件下孵育5 min。
6. 在1小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)。
應(yīng)用實(shí)例
應(yīng)用領(lǐng)域
細(xì)胞的早期凋亡及區(qū)分凋亡與壞死細(xì)胞
服務(wù)周期
我公司在正式接受實(shí)驗(yàn)委托2個(gè)星期左右完成實(shí)驗(yàn)并提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
客戶須知（對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng)）
需提供細(xì)胞類型，處理?xiàng)l件。
上海試劑銷售供應(yīng)細(xì)胞株細(xì)胞系 部分細(xì)胞產(chǎn)品現(xiàn)貨，復(fù)蘇周期短，平價(jià)，狀態(tài)好！！
細(xì)胞株細(xì)胞系 |
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英文名稱 | 中文名稱 | 價(jià)格 |
NFS-60 | NFS-60細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Human bel7402 | 人肝癌細(xì)胞系 | 詢價(jià) |
Human Dul45 | 人前列腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Human WRO | Human WRO | 詢價(jià) |
Human ARO | Human ARO | 詢價(jià) |
Human panc28 | 人胰腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
human PNT1A | human PNT1A | 詢價(jià) |
mouse N3 | mouse N3 | 詢價(jià) |
human MCF10A | 人正常乳腺上皮細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BT549 | 人乳腺細(xì)胞 | 詢價(jià) |
CaCo2 | 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SGC7901 | 人胃癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HCT116 | 人結(jié)腸癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MC3T3-L1 | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | 詢價(jià) |
C3H10 | 小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系 | 詢價(jià) |
HCT8 | 人結(jié)腸癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MGC-803 | 人胃癌細(xì)胞系 | 詢價(jià) |
ACDC5 | ACDC5 | 詢價(jià) |
293Ampho | 293Ampho | 詢價(jià) |
2HO-MEF | 2HO-MEF | 詢價(jià) |
ATDC5日本 | ATDC5 | 詢價(jià) |
SL4 | SL4 | 詢價(jià) |
HMEC-1 | 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 | 詢價(jià) |
Hut78 | 人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SNU-398 | 人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SNU-449 | 人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SNU-475 | 人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Y79 | 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤 | 詢價(jià) |
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HA-VSMC | 人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
A-204 | 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
PL45 | 人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Panc 10.05 | 人胰腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
NCI-H508 [H508] | 人結(jié)腸直腸腺癌 | 詢價(jià) |
SK-N-DZ | 人成神經(jīng)瘤細(xì)胞-骨髓 | 詢價(jià) |
NCI-H441 [H441] | 人肺腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
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HT-1376 | 人膀胱癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
RWPE-2 | 人正常前列腺上皮細(xì)胞 | 詢價(jià) |
COLO 320HSR | 人結(jié)腸癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Ramos（RA1） | 人B淋巴細(xì)胞 | 詢價(jià) |
T98G [T98-G] | 人多形性惡性膠質(zhì)瘤 | 詢價(jià) |
T2(174×CEM.T2) | 人淋巴母細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BE(2)-C | 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
KYSE-450 | 人食管癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
JF-305 | 人胰腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
EAhy926 | 人臍靜脈融合細(xì)胞 | 詢價(jià) |
NCI-h1688 | 人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
EC9706 | 人食管癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HT1080 | 人纖維肉瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
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3AO | 人卵巢癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
PLA-802 | 人惡性橫紋肌肉瘤 | 詢價(jià) |
CA46 | 人淋巴瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
GP2-293 | 人胚腎上皮包裝細(xì)胞 | 詢價(jià) |
LM3 | 高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MHCC97-H | 高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MHCC97-L | 低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HSF | 人皮膚成纖維細(xì)胞 | 詢價(jià) |
G422 | 小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BALL-1 | 人B淋巴細(xì)胞急性白血病細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Hep 3B-s3 | 人宮頸癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HMC | 人腎小球系膜細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MDCK (NBL-2) | 馬-達(dá)二氏犬腎細(xì)胞系 | 詢價(jià) |
PT-K75 | 豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 | 詢價(jià) |
LTPA | 小鼠胰腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
DSL-6A/C1 | 大鼠胰腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SP2/MIL-6 | 小鼠骨髓瘤B淋巴細(xì)胞 | 詢價(jià) |
DI TNC1 | 大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞 | 詢價(jià) |
IEC-18 | 大鼠回腸細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Sp2/0-Ag14 | 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
JB6 Cl 30-7b | 小鼠表皮細(xì)胞 | 詢價(jià) |
WB-F344 | 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞 | 詢價(jià) |
GH3 | 大鼠垂體瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BRL3A | 大鼠正常肝細(xì)胞 | 詢價(jià) |
PK15 | 豬腎細(xì)胞系 | 詢價(jià) |
Bv-2 | 小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HSC-T6 | 大鼠肝星形細(xì)胞 | 詢價(jià) |
J774A.1 | 小鼠單核巨噬細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SV40-MES-13 | 小鼠腎小球系膜細(xì)胞 | 詢價(jià) |
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C) | 小鼠淋巴瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MA-891 | 小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 | 詢價(jià) |
Marc145 | 猴腎細(xì)胞 | 詢價(jià) |
ROS1728 | 大鼠成骨細(xì)胞 | 詢價(jià) |
B16F1 | 小鼠黑色素瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
AGS 胃癌 |
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MKN-45 胃癌 |
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Hep 3B-mock | 轉(zhuǎn)染了microRNA-mock基因的陰性對(duì)照細(xì)胞 | 詢價(jià) |
GT1.1 /GT1-1 | 小鼠垂體瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BNP-9 |
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mouse podocyte | 腎小球足細(xì)胞 | 詢價(jià) |
AR42J | 大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
PC-9 | 人肺腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MKN-74 | 胃癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
CaES-17 | 人食管癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
TE-13 | 人食管癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
LTEP-α-2細(xì)胞 | 人肺腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MCF-7/ADR | 人乳腺癌細(xì)胞（耐藥） | 詢價(jià) |
COC1 | 人卵巢癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
IGROV1 | 人卵巢癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
SKOV3/DDP | 人卵巢癌細(xì)胞（耐藥） | 詢價(jià) |
HTR-8 | 人滋養(yǎng)細(xì)胞 | 詢價(jià) |
NCI-H295R | 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
H4-II-E-C3 | 大鼠肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
ARPE-19 | 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞 | 詢價(jià) |
RGC-5 | 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株細(xì)胞 | 詢價(jià) |
NCI-h1688 | 人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
BEAS-2B | 人支氣管上皮細(xì)胞 | 詢價(jià) |
RPMI 8226 | 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
K562/ADP | K562耐阿霉素細(xì)胞株 | 詢價(jià) |
BEND.3 | 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 | 詢價(jià) |
MHCC97-H | 高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
MHCC97-L | 低轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
CmESCs-11 | 小鼠胚胎干細(xì)胞 | 詢價(jià) |
U87 MG | 人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | 詢價(jià) |
YAC-1 | 小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞) | 詢價(jià) |
ECA109 | 人食管癌細(xì)胞 | 詢價(jià) |
HO8910 | 卵巢癌 | 詢價(jià) |
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NCTC 1469 | 小鼠正常肝細(xì)胞 | 詢價(jià) |
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