一個合格的質粒含有以下組成部分：

復制起始位點Ori：即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點，而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。

抗生素抗性基因：可以便于篩選或檢測，如Amp+ 、Kan+。

多克隆位點MCS：克隆攜帶外源基因片段。

P/E：啟動子/增強子。

Terms：終止信號。

加poly(A)信號：可以起到穩定 mRNA 作用。

 如何閱讀質粒圖譜：

*步：首先看 Ori 的位置，了解質粒的類型（原核/真核/穿梭質粒）。

第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。

--Ampr   水解β-內酰胺環，解除氨芐的毒性；

--tetr   可以阻止四環素進入細胞；

--camr   生成氯霉素羥乙酰基衍生物，使之失去毒性；

--neor(kanr)   氨基糖苷磷酸轉移酶 使G418（長那霉素衍生物）失活；

--hygr   使潮霉素β失活。

第三步：看多克隆位點（MCS）。它具有多個限制酶的單一切點，便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標志基因的失活，從而便于篩選。MCS決定了能不能放置目的基因以及如何放置目的基因。

第四步：再看外源DNA插入片段大小。質粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。

第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止信號，這是用來區別克隆載體與表達載體。在克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用哪種載體，要以實驗目的為依據。

啟動子：促進DNA轉錄的DNA序列，這個DNA區域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結合并使之開始轉錄的部位，但啟動子本身不被轉錄。

增強子/沉默子：增強子為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強鄰近基因轉錄過程的調控序列，其作用與增強子所在的位置或方向無關（即在所調控基因上游或下游均可發揮作用）。/沉默子：負增強子，負調控序列。

核糖體結合位點/起始密碼/SD序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA有核糖體的兩個結合位點，對于原核而言是AUG（起始密碼）和 SD序列。

轉錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結構基因的zui后一個外顯子中有一個 AATAAA的保守序列，此位點down-stream有一段GT或T富豐區，這2部分共同構成poly(A）加尾信號。

為什么質粒圖譜上有的箭頭順時針有的箭頭逆時針？那其實是代表兩條DNA鏈，即質粒是環狀雙鏈 DNA，它的啟動子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。

如何選擇載體

把目的基因通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫做載體（vector）。基因工程所用的vector實際上是用來攜帶目的基因片段進入受體細胞的 DNA。

選擇載體主要依據構建的目的，同時要考慮載體中應有合適的限制酶切位點。如果構建的目的是要表達一個特定的基因，則要選擇合適的表達載體。

細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒在另一室。

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