文章標(biāo)題：K562 K562細(xì)胞 細(xì)胞株培養(yǎng)

關(guān)鍵詞：K562細(xì)胞培養(yǎng)，K562細(xì)胞價(jià)格，K562細(xì)胞來源，K562細(xì)胞特征特性，K562細(xì)胞染色鑒定

中文名稱：人慢性髓原白血病細(xì)胞

生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮生長(zhǎng)

1.試劑和溶液

1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色

2.實(shí)驗(yàn)步驟

1電泳：將裂解液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，80v，30分鐘，120v，90分鐘；

2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，10v，150分鐘；

3染色：氨基黑染色5分鐘，甲醇褪去背景色，觀察條帶；

4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說明書，根據(jù)客戶預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，稀釋度上下浮動(dòng)一個(gè)數(shù)量級(jí)都為正常），將膜放入對(duì)應(yīng)的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜；

7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標(biāo)記的二抗（參照二抗說明書進(jìn)行稀釋）中，室溫混搖2h；

9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標(biāo)的膠片上，迅速用保鮮膜包好；

11曝光：把底片放在暗盒中，根據(jù)熒光強(qiáng)度分別對(duì)X光膠片作不同時(shí)間段的曝光，曝光結(jié)束后，將底片取出，1min顯影，30s清洗，1min定影，30s清洗，晾干；

12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描，做后續(xù)結(jié)果分析。

選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。但由于不同細(xì)胞貼壁后面積差異很大，因此，在進(jìn)行MTT試驗(yàn)前，要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其貼壁率、倍增時(shí)間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長(zhǎng)曲線，確定試驗(yàn)中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時(shí)間，以保證培養(yǎng)終止致細(xì)胞過滿。這樣，才能保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細(xì)胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。

注意:細(xì)胞株的生物等級(jí)，由于有些細(xì)胞株及菌株屬于管制品，所以從國(guó)外購(gòu)貨比較麻煩。

形態(tài)學(xué)改變:細(xì)胞體積明顯增大,為成熟淋巴細(xì)胞3-4倍。核膜清晰,核染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀。核內(nèi)見明顯核仁1-4個(gè)。胞漿豐富,嗜堿性,有偽足樣突出。胞漿內(nèi)有時(shí)可見小空泡。

細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

生物試劑銷售中心細(xì)胞庫ATCC/ScienCell細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)|細(xì)胞培養(yǎng)基 *的ATCC細(xì)胞，ATCC傳代細(xì)胞，sciencell細(xì)胞，sciencell原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，原代細(xì)胞培養(yǎng)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，植物細(xì)胞培養(yǎng)提供者。 細(xì)胞培養(yǎng)基 主要經(jīng)營(yíng)品牌有ATCC，ScienCell，DSMZ，ALLCELLS，DV Biologics，Stemgent等，其中ATCC/ScienCell細(xì)胞zui為，傳代細(xì)胞，復(fù)蘇細(xì)胞，第二代細(xì)胞等，*，買的放心，做實(shí)驗(yàn)也放心，歡迎訂購(gòu)！

相關(guān)熱賣細(xì)胞有：HOS細(xì)胞，143B細(xì)胞，NS-1細(xì)胞，IR983F細(xì)胞， LOX細(xì)胞， FO細(xì)胞， J558細(xì)胞， Y3-Ag 1.2.3細(xì)胞，HT-22細(xì)胞，MC38細(xì)胞，SW48細(xì)胞，DC2.4細(xì)胞，U2OS細(xì)胞，U266細(xì)胞，RPMI 8226，MCM細(xì)胞，COV434細(xì)胞，H9C2細(xì)胞，Hela細(xì)胞，MKN1細(xì)胞，KG-1a細(xì)胞，HL-60細(xì)胞，MV4-11細(xì)胞，U937細(xì)胞，MOLM-13細(xì)胞，MOLM-14細(xì)胞，K562細(xì)胞，CCRF-CEM細(xì)胞，HS 505.T細(xì)胞等

選擇試劑銷售的理由：

高質(zhì)量ATCC·ScienCell·DSMZ等產(chǎn)品對(duì)您的研究非常重要

所有細(xì)胞入庫之前均經(jīng)過嚴(yán)格的細(xì)胞質(zhì)量檢測(cè)和鑒定

所有細(xì)胞在出庫之前均經(jīng)過一次嚴(yán)格的質(zhì)檢認(rèn)證

確保細(xì)胞到每一位用戶手里都是狀態(tài)