文章標題：J558細胞

關鍵詞：J558細胞培養，J558細胞價格，來源，染色鑒定，特征特性

中文名稱：小鼠骨髓瘤細胞

生長狀態：貼壁生長

來源：美國ATCC

1.試劑和溶液

乙醇: 無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇

抗原修復液: 0.01M的檸檬酸鈉緩沖液：58.82g檸檬酸三鈉及7.56g檸檬酸溶于200ml純水，調pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作液

3%過氧化氫-甲醇: 30%的過氧化氫與無水甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標親和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇：0.5～1%鹽酸，95.0～95.5%乙醇

蘇木素：蘇木精2g溶于250ml無水乙醇，十六水合硫酸鋁17.6g 溶與750ml純水，以上溶液充分混合，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實驗步驟

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫蠟：二甲苯浸泡三次，每次10分鐘；

3水化：依次經過無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇浸泡，每次5min；

4洗滌：自來水沖洗1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復：放入稀釋100倍的檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫冷卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次，PBS浸泡1次，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過氧化氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

9封閉：加入適當體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

11一抗：加入反應體積為0.15ml，適合濃度的一抗, 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

13加入適當體積生物素標記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

15加入適當體積酶標親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵育10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切片上，室溫顯色1~5min，自來水沖洗；

18復染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖洗5min；

19分化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化，自來水沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍，自來水沖洗2次。

20脫水：經過70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水乙醇浸泡，每次5min；

21透明：二甲苯浸泡2次，每次10-15min；

22封片：晾干后加中性樹膠，蓋玻片封片；

23結果：顯微鏡觀察，記錄結果。 

細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒在另一室。

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