染色質(zhì)免疫共沉淀，又叫Chip（Chromatin Immunoprecipitation）。Chip又正好是英語里面薯片的意思。為了有趣，就叫薯片實驗吧。試劑銷售做薯片做了幾個月，時間不長，但深刻體會到了魔鬼都在細(xì)節(jié)中和細(xì)節(jié)決定成敗?，F(xiàn)在把自己認(rèn)為值得注意的15個細(xì)節(jié)總結(jié)如下：

1、cell counting：盡量做到準(zhǔn)確準(zhǔn)確再準(zhǔn)確，否則會影響input結(jié)果。

2、cross link：甲醛的終濃度是1%，這個基本所有的protocol上都會強調(diào)。

3、resuspend cells with SDS:一定要選用小的tip頭，在液面下吹打，否則很容易產(chǎn)生氣泡，后面的sonication就麻煩了。

4、sonication：Chip實驗中zui重要的一部分，合適的條件要自己摸索，可以一次嘗試不同次數(shù)的sonication，然后建議采用EZ-ChIP上推薦的方法看看sonication的效果如何。

5、加入salmon sperm DNA/Protein A or G之前要先混勻，因為salmon sperm DNA是很粘稠的物質(zhì)，若不混勻，后面你會發(fā)現(xiàn)beads的量不一樣，自然也會影響實驗的結(jié)果。

6、wash 的時候前面幾個步驟可以不用洗的太干凈，但zui后一個要盡量吸干凈，必要時可用gel loading tips吸。

7、含beads的samples離心時，有的protocol上推薦是1000rpm，45秒，但可以根據(jù)情況調(diào)整，但要注意轉(zhuǎn)速不能太快防止beads破碎。（當(dāng)然如果采用的是magnetic的beads就不存在這個問題）

8、reverse crosslink可以是65°C 4個小時，也可以overnight。

9、reverse crosslink后的在進(jìn)行下面步驟之前建議先離心，把蒸發(fā)到離心管蓋子上的部分離下來。

10、每次行real time PCR之前都要把sample離心保證取樣的準(zhǔn)確。

11、1~10ul的槍取3ul以上才比較準(zhǔn)確，所以考慮好自己PCR反應(yīng)體系的配置。

12、一個Chip實驗一般需要3~4天的時間。但是，其中有幾個步驟是可以中途停下來的。畢竟，誰也沒有辦法不眠不休地連續(xù)3，4天一口氣做完。下面是幾個可以停下來喘口氣的地方：

（1）細(xì)胞收集：用含蛋白酶抑制劑的PBS洗滌離心，去上清的細(xì)胞收集液可置-80°C凍存；

（2）用SDS重懸細(xì)胞后可置-80°C凍存；

（3）sonication結(jié)束，離心后的上清置新的離心管后可-80°C凍存；

（4）reverse cross-link后的標(biāo)本可-80°C凍存。

凍存后就可以該干啥干啥去了。想接著做的時候，拿出來解凍就可以啦。

13、agarose beads 的wash過程中以及后面的DNA提取過程中乙醇的wash，可以用細(xì)胞室的那種吸引器，接上200ul的tip頭吸，這樣會節(jié)省很多時間（每個實驗室情況可能不一樣）。

14、DNA提取后建議用水溶解DNA，因為TE buffer里的EDTA可能會影響PCR反應(yīng)體系中的Mg2+。

15、溶解DNA的水量可以根據(jù)PCR反應(yīng)體系的要求適當(dāng)調(diào)整。

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