Q:在測定細胞周期的時候,由于固定、消化等處理后會出現很多細胞碎片,影響測量結果,無法找到G1期細胞群。另外,在測定亞二倍體時,不是那么很清楚的顯示出來。
A:方法改進:
在測定細胞周期的時候(以BD公司的Calibur為例),除了設置好獲取數據的模版外,另外設置以FL3為橫坐標的直方圖,測量模式為對數(log),調整放大倍數,使二倍體峰出現在橫坐標10*3的位置,就很容易的找到了二倍體峰和細胞周期個時相細胞的分布情況。根據它再調節FL2(線性模式下)的放大 倍數,使二倍體峰在10*2的位置即可。
Q:我要做流式分析細胞周期,我大概收集了10的6次方細胞,但細胞在乙醇固定之后,還看到有細胞沉淀的,但PBS洗滌兩次之后,就基本沒什么細胞沉淀了,上機發現就發現不了細胞了。這是怎么回事啊?怎么解決這個問題啊?
A:很可能是洗細胞的過程中丟失了,解決辦法有:
(1)盡量采用尖底的離心管和水平離心機
(2)離心后盡量用吸管吸取上清,不要傾倒;吸上清時殘留1mm左右的水膜,不要吸完。
(3)離心的轉速或時間可稍微增加一點兒
(4)每次加試劑時,吸頭不要接觸液面;混勻時不要用吸頭吹打,以免吸頭掛壁帶走部分細胞。
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