細胞計數

原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數目即可換算出每mL細胞懸液中的細胞數量。

操作步驟：

1. 將計數板及蓋玻片擦拭干凈，并將蓋玻片蓋在計數板上。

2. 輕輕吹打細胞懸液，使細胞均勻分布。吸出少許細胞懸液滴在細胞入口，使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間，靜置1~2min，使細胞沉降。注意蓋玻片下不要有氣泡，也避免細胞懸液進入旁邊的槽中。

3. 在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的細胞進行計數，壓在大格四周邊線上的細胞只計數壓在2條邊線上的細胞（如右側和下方）。若鏡下有2個細胞組成的細胞團，則應按單個細胞計算；若細胞團數量較多，占細胞總量的10%左右，則說明細胞分散不好會導致計算不準確，需要重新制備細胞懸液。

4. 按公式計數細胞數量   細胞數/mL=四個大格內細胞總數×104/4

(每一個大格的體積為長1mm×寬1mm×高0.1mm=0.1mm3，1mL=1000 mm3，因此計算時需×104)

細胞活力檢測

    在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力。由組織中分離細胞一般要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用；復蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復蘇的效果。細胞懸液制備后，zui常用活體染料臺盼藍對細胞染色，進行細胞計數。

    正常細胞胞膜完整，臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞胞膜通透性增加，臺盼藍能進入細胞內而使細胞著色（藍色）。

操作步驟：

1. 配制4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100mL，用濾紙過濾，4℃保存。使用時用PBS稀釋至0.4%。

2. 胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，并作適當稀釋（106 cells/mL）。

3. 取少量細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合，輕輕吹打混勻，染色2~3min。

4. 顯微鏡下觀察，死細胞著淺藍色并膨大，無光澤；活細胞保持正常形態，無色透明有光澤。若需計算活細胞率則將染色的細胞懸液滴入細胞計數板計數。

活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100%

注意事項：臺盼藍染細胞時，時間不宜過長。否則，部分活細胞也會著色，會干擾計數的準確性。