犬降鈣素原(PCT) elisa試劑盒操作說明：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

600ng/L  5 號標準品  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

300ng/L  4 號標準品  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

150ng/L  3 號標準品  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

75ng/L  2 號標準品  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

37.5ng/L  1 號標準品  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

犬降鈣素原(PCT) elisa試劑盒實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中犬降鈣素原(PCT)水平。用純化的犬降鈣素原(PCT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素原(PCT)，再與HRP 標記的降鈣素原(PCT)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素原(PCT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中犬降鈣素原(PCT)濃度。