一抗的選擇 

  檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：  分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型l  樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)l  樣本的種屬l  抗體宿主的種類l  抗體的標(biāo)記和檢測(cè)l  

1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型    

一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB  IHC  ICC  ELASA分析等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗(yàn)。  

2.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)   

了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮 

待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。l 樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì)在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來l  

3.樣本的物種 

應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過，應(yīng)通過序列比對(duì)的方法來預(yù)測(cè)交叉反應(yīng)，可應(yīng)用Expasy 和 NCBI BLAST來進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。  

4.一抗宿主物種的選擇    

一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要，對(duì)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含IgG的細(xì)胞裂解物樣本的western blotting檢測(cè)，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在western blot檢測(cè)中則結(jié)合出現(xiàn)IgG分子50 and 25 kDa的重鏈和輕鏈條帶。   

如何選擇二抗——根據(jù)一抗種屬及類型選擇合適的二抗 

廣義上是指專門和進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對(duì)試驗(yàn)選擇不同的二抗，艾美捷能為您的科研工作提供和zui全面的二抗產(chǎn)品。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：

 【一抗的種屬來源】 

二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。艾美捷能為您提供zui全的抗不同種屬的*二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、人、豚鼠、豬、馬、牛、雞、鴨等二抗。 

【一抗的類別亞型】 

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中都會(huì)有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG。艾美捷能為您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特異性只結(jié)合IgM的Anti IgM （mu） Antibody、IgA的Anti IgA （alpha-Antibody、IgE的Anti IgE （epsilon） Antibody等。 

【二抗的種屬來源】 

一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里， 如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里，如果其中一個(gè)一抗是山羊來源的，一個(gè)是小鼠來源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。 有相應(yīng)的驢來源的二抗，非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。 

【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】 

一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于Western Blot和ELISA，zui常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使用Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中，則需要選擇不同的熒光標(biāo)記；而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。艾美捷能為您提供上述所有不同類型標(biāo)記的二抗。 

【是否經(jīng)過血清吸附過的二抗】 

為減少二抗與樣本的非特異性結(jié)合，艾美捷還能為您提供不同血清吸附的*二抗。如您的檢測(cè)樣本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗，如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高，那我們向您推薦經(jīng)過人血清吸附過的抗小鼠源的二抗，這種二抗由于經(jīng)過人血清吸附而排除了與人源組織（如IgG等）可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG，因此將非特異性結(jié)合降低到zui低。 【Anti-IgG還是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment】 

在一些如胸腺、脾臟、血液的組織以及造血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)，通常含有較多的Fc受體，這時(shí)候選擇二抗時(shí)選擇Anti-IgG, F（ab’）2 fragment這樣的特異性二抗，這樣就消除了由于Fc部分與IgG的非特異性結(jié)合。常規(guī)的Anti-IgG （H+L）二抗與IgG的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，即與IgG的Fc的F（ab’）2片段都能結(jié)合；由于IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此Anti-IgG （H+L）與它們都有交叉反應(yīng)。而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment經(jīng)過了IgG Fc片段的吸附，因此只與IgG的F（ab’）2片段結(jié)合，然而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此與它們也有交叉反應(yīng)。 【Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）】 

在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，只需要檢測(cè)樣本里的IgG或者IgM，常規(guī)的Anti-IgG （H+L）由于與IgG的重鏈和輕鏈都有結(jié)合反應(yīng)，而IgG、IgM、IgA都有保守的輕鏈結(jié)構(gòu)域，因此不能特異性的檢測(cè)某種類型的IgG或者IgM。這時(shí)候就需要針對(duì)特殊類型Ig分子的二抗。艾美捷備有全面的二抗現(xiàn)貨產(chǎn)品并能提供zui完整的二抗產(chǎn)品線。主要二抗品牌為zui大的二抗產(chǎn)品以及前沿抗體生產(chǎn)商EarthOx。按照標(biāo)記分，有HRP、AP、生物素等標(biāo)記二抗，FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等熒光二抗；按照檢測(cè)物種分，有抗人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉鼠、狗、牛，以及多種細(xì)菌類二抗；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同類型抗體。 

如抗原為A C物質(zhì)，產(chǎn)生的抗體為抗-ac， 如抗原為B C物質(zhì)，產(chǎn)生的抗體為抗-bc，   

AC物質(zhì)和抗-ac、BC物質(zhì)和抗-bc產(chǎn)生的是特異性結(jié)合， 而AC物質(zhì)和抗-bc、BC物質(zhì)和抗-ac就會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng).  

什么是抗體的交叉反應(yīng)性呢  

抗原分子表面存在著能與抗體相互作用的部位即抗原決定簇,一種抗原物質(zhì)可以有兩個(gè)或更多的決定簇。研究表明,抗體是從抗原決定簇的立體結(jié)構(gòu)而不是從抗原的全面分子排列來“認(rèn)識(shí)”抗原的。這樣,有時(shí)一種抗體可以與分子結(jié)構(gòu)并不*相同但具有類似抗原決定簇的不同抗原起反應(yīng),這稱為交叉反應(yīng)。如果你的抗體和其它種屬有交叉反應(yīng)，理論上可以用于人源的WB。 

所謂抗原和抗體的特異性結(jié)合其實(shí)也是相對(duì)的，抗原和抗體結(jié)合也就是十幾到二十幾個(gè)氨基酸，理論上在其他的蛋白中也可能存在同樣或者相似的序列。 

其次至于抗體為什么能和不同種屬同一個(gè)分子反應(yīng)，那是因?yàn)橛幸徊糠值鞍自跈C(jī)體發(fā)揮較為重要的作用，因此可能在低等動(dòng)物就存在，因此該分子的氨基酸序列存在較為嚴(yán)格的保守性，也就是同樣的分子在不同種屬的序列是相同或者相似的，比如VEGF等。所以就出現(xiàn)免疫的時(shí)候是用人的抗原，但是后來產(chǎn)生的抗體可以和其他很多動(dòng)物種屬反應(yīng)。 

樓主說的買抗體的時(shí)候?yàn)槭裁匆⒁夥N屬來源，這個(gè)和你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠嘘P(guān)，比如有的人同時(shí)要做人體試驗(yàn)和某個(gè)動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，比如大鼠，那么就希望買的抗體可以同時(shí)針對(duì)人和大鼠，這樣就可以節(jié)約資源。相反如果有人只做一個(gè)種屬的試驗(yàn)，那么可能就希望抗體的特異性更高點(diǎn)，那么就和其他種屬的交叉反應(yīng)越少越好。 至于抗體本身的來源，主要和你下游試驗(yàn)有關(guān)，也就是二抗和顯色有關(guān)。