無菌條件下,切取動物軟骨組織剪碎為1立方毫米大小;加入0.25%胰蛋白酶37℃水浴消化15~20分鐘;離心10分鐘(1000轉(zhuǎn)/分),棄去胰酶再 換成0.2%Ⅱ型膠原酶37℃水浴消化30分鐘至2小時,期間每15分鐘混勻一次或者不停攪拌(用磁力攪拌器)至液體渾濁為止,加胎牛血清數(shù)滴終止消化, 加1640培養(yǎng)液5~10ml混勻;用100目金屬網(wǎng)過濾,濾液離心10分鐘(1000轉(zhuǎn)/分),棄去上清夜,再加含10%胎牛血清1640培養(yǎng)液5ml 放入培養(yǎng)瓶進行孵育培養(yǎng).

一型膠原酶，酶：組織塊=2:1。  37度下消化30分鐘，不斷搖晃，離心洗滌。

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分離劑：在兩種相同的或不同的材料之間、材料與模具之間隔離膜，使二者間不發(fā)生粘連，完成操作后易于分離的液劑。種類為：（1）石膏分離劑：（2）樹脂分離劑  （3）蠟分離劑  （4）其他分離劑如硅油、凡士林等。 是指有關(guān)生命科學(xué)研究的生物材料或有機化合物，以及臨床診斷、醫(yī)學(xué)研究用的試劑。由于生命科學(xué)面廣、發(fā)展快，因此該類試劑品種繁多、性質(zhì)復(fù)雜。主要有電泳試劑、色譜試劑、離心分離試劑、免疫試劑、標記試劑、組織化學(xué)試劑、透變劑和致癌物質(zhì)、殺蟲劑、培養(yǎng)劑、緩沖劑、電鏡試劑、蛋白質(zhì)和核酸沉淀劑、縮合劑、超濾膜、臨床診斷試劑、染色劑、抗氧化劑、防霉劑、去垢劑和表面活性劑、生化標準品試劑、生化質(zhì)控品試劑、分離材料等等。