AdvCell^?骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血清培養(yǎng)基

  AdvCell^?骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血清培養(yǎng)基根據(jù)哺乳類生物干細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)、胎牛血清以及其他補(bǔ)給成分。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使干細(xì)胞在理想營養(yǎng)平衡狀態(tài)下進(jìn)行多代擴(kuò)增而不發(fā)生分化（至少在10代以內(nèi)）。

★  產(chǎn)品內(nèi)容

★  產(chǎn)品適用范圍

    適用于人及哺乳類來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)。

★  使用注意事項(xiàng)

1. *培養(yǎng)基的制備：將以上AdvCell^?  骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞血清培養(yǎng)基（BSM0001）中的AdvCell^? 

   骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （BM0001)、AdvCell^?  胎牛血清 （BS0001)、AdvCell^? 骨髓間充質(zhì)干細(xì)

   胞培養(yǎng)添加劑（BSM0004）于37℃解凍并迅速混合。

2. *培養(yǎng)基的存儲(chǔ)：配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。

3. 根據(jù)需要，培養(yǎng)過程中可添加一定劑量青霉素∕鏈霉素(P∕S)。

4. 如客戶自制的凍存液凍存的細(xì)胞是用作臨床治療，應(yīng)避免用甘油作為保護(hù)劑。

★  培養(yǎng)條件

    37℃，5% CO₂，無菌恒溫培養(yǎng)。

★  相關(guān)操作

【復(fù)蘇】

1.將*培養(yǎng)基放入37°C水浴中預(yù)熱；

2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細(xì)胞）；

3.在超凈臺(tái)中加入5 ml的 *培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000 rpm離心5 min；

4.棄上清,加入5 ml的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）；

5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO₂ 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.第二天用新鮮的*培養(yǎng)基給細(xì)胞換液。

【培養(yǎng)】

1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，即可傳代培養(yǎng)；

2.37℃水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺(tái)中，棄掉T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的*培養(yǎng)基，加入2 ml PBS清洗，再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA

  消化細(xì)胞；

4.在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，即可加入5 ml *培養(yǎng)基 終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15 ml離心管中，1000 rpm離心5 min；

7.棄上清,加入15-20 ml的 *培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T-75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例接種到T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×10⁴cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25  瓶），混合細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布；

8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂ 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

9.每?jī)商煊眯迈r、預(yù)熱的*培養(yǎng)基進(jìn)行換液。

【凍存】

1. 細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對(duì)待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)；

2. 1000 rpm離心5分鐘，去掉上清；

3. 根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細(xì)胞密度在1×10⁶/ml左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞

   密度）；

4. 輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻），將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼

   上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋；

5. 將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃；

6. 第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。