生物柱離心式泰去內(nèi)毒素超純質(zhì)粒小量抽提試劑盒說明書： wash A ,wash B和wash C: 用前按照試劑 瓶上標(biāo)明的量分別加入分析純異丙純或95%的分析純乙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子。

用1ml ddH2O (滅菌)*溶解rna酶，將RNA酶放入水中煮，水沸后再煮沸20分鐘，關(guān)掉火，緩慢冷至室溫后，將RNA酶取出，全部加入solution I，充分混勻后，將solution I放入4℃保存.

使用本試劑盒可從1—10ml過液培養(yǎng)菌液中抽提10—40ug超純度質(zhì)粒(OD260/OD280≈1.8)。所得到質(zhì)粒dna可直接用于轉(zhuǎn)染、測(cè)序、酶切、克隆等分子生物學(xué)操作。無需酚抽提、乙醇沉淀、CsCl離心。

實(shí)驗(yàn)步驟：

將菌液倒入1.5ml eppendorf 管，5000 r m p離心5分鐘，棄上清液，倒轉(zhuǎn)管子在吸水紙上砸?guī)紫?，將殘余液體去除。votex，加入250ul solution I， votex充分混勻。

加入250ul solution II，緩慢顛倒4次混勻，室溫放置5分鐘。(注意：solution II天冷時(shí)會(huì)沉淀，若發(fā)現(xiàn)溶液變得混濁，37℃溶化后再用)

加入350ul solution IIIB，立即緩慢顛倒4次混勻，室溫放置5分鐘。

13000 r m p離心10分鐘。

小心將上清750ul吸入到一新的1.5ml eppendorf 管(注意：不要將白色沉淀吸到1.5ml eppendorf 管中。若發(fā)現(xiàn)有白色沉淀吸到1.5ml eppendorf 管中，將1.5ml eppendorf 管中的液體重新13000 r m p離心10分鐘，將上請(qǐng)液重新吸入一新的1.5ml eppendorf 管中。)。

加入75ul(1/10體積)solution IV, 緩慢顛倒3次混勻。放入4℃ 30分鐘，中間緩慢顛倒混勻2次。

13000 r m p離心10分鐘。

將結(jié)合柱放入2 ml離心管，小心吸750ul上清液于吸附柱中(沉淀很小，注意不要吸到沉淀)，室溫靜置2分鐘。

13000 r m p離心1分鐘，取出結(jié)合柱，棄2ml離心管中的廢液，將結(jié)合柱再裝入2 ml離心管。

加入500ul wash A(用前加入分析純異丙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子)于結(jié)合柱中，室溫放置3分鐘。13000 r m p離心1分鐘。棄2 ml離心管中的廢液。

將結(jié)合柱再裝入2 ml離心管中,加入650ul wash B(用前加入95%的分析純乙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子)于結(jié)合柱中，13000 r m p離心1分鐘。棄2 ml離心管中的廢液。

將結(jié)合柱再裝入2 ml離心管中,加入500ul wash C(用前加入95%的分析純乙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子)于結(jié)合柱中，13000 r m p離心1分鐘。

倒掉2 ml離心管中的廢液，將結(jié)合柱裝入2 ml離心管，13000 r m p離心2分鐘。

將結(jié)合柱裝入一新的1.5ml eppendorf 管中(由于各廠家1.5ml eppendorf管的口徑不一致，管蓋可能與結(jié)合柱的口徑不匹配)，室溫放置數(shù)分鐘以確保乙醇揮發(fā)干凈。在膜中央小心加入50ul TE。不要戳破膜。室溫放置2分鐘。

13000 r m p離心1分鐘，1.5m離心管中即為抽提的去內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA。

注意事項(xiàng)：

1.提高洗脫液的溫度(65℃左右)或?qū)⒔Y(jié)合柱于室溫或37℃水浴靜置1分鐘以上，可提高DNA的得率。

2.不要在結(jié)合柱上做標(biāo)記，以免乙醇將字跡褪掉。

3.所有試劑用后蓋緊蓋子.

4. solution II天冷時(shí)會(huì)沉淀，若發(fā)現(xiàn)溶液變得混濁，37℃溶化后再用。

5.本試劑盒通常情況下采用1-1.5 ml過液培養(yǎng)的菌體進(jìn)行質(zhì)粒抽提。若所培養(yǎng)的菌體濃度較低或質(zhì)粒在宿主菌中的拷貝數(shù)較低，可適當(dāng)增加起始菌體的量至5-10 ml，同時(shí)Solution I、Solution II、solution IIIB的用量相應(yīng)擴(kuò)大，但要確定比例關(guān)系為5：5：7，其他試劑用量不變。

6.起始菌體過量可能會(huì)導(dǎo)致抽提的質(zhì)粒質(zhì)量不好，如質(zhì)粒的得率較低，存在RNA或蛋白污染等問題。下列現(xiàn)象可提示菌體過量：

加入Solution II混勻并靜置5 min，溶液沒有變成透明;或溶液雖然已變透明，但顛倒離心管時(shí)發(fā)現(xiàn)溶液很粘稠或不均勻。

加入Solution IIIB后，有大塊物生成，離心時(shí)很難將其離到管底。

7.本試劑盒中，所用吸附柱zui大容量為700μl，對(duì)雙鏈DNA的zui適吸附量為20μg。若經(jīng)過Solution I、Solution II、Solution IIIB處理并離心后的上清體積超過700μl，可對(duì)同一吸附柱分批上樣多次。

8.操作步驟2、3、4中，加入Solution II、IIIB之后，應(yīng)盡量小心溫和混勻樣品;若混和劇烈可能會(huì)導(dǎo)致zui后抽提出的質(zhì)粒超螺旋解開或雙鏈發(fā)生斷裂。

可以根據(jù)質(zhì)粒提取的量來選擇質(zhì)粒提取純化試劑盒，例如大中小級(jí)別的；此外也可以根據(jù)提取質(zhì)粒的使用用途來選擇，轉(zhuǎn)染級(jí)別，測(cè)序級(jí)等純化試劑盒。上海心語生物科技有限公司推薦質(zhì)粒純化產(chǎn)品大全：凝膠純化試劑盒，磁性的質(zhì)粒純化試劑盒，微孔板質(zhì)粒純化試劑盒，質(zhì)粒純化試劑盒（Mega），酵母質(zhì)粒純化試劑盒。