新生小牛血清制備

一、目的:

為了保障新生小牛血清產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性，制定以下操作方法，以規(guī)范新生小牛血清生產(chǎn)制備。

二、操作方法：

（一）采血

1. 挑選出生在48小時(shí)以內(nèi)的新生小牛，空腹8小時(shí)以上，以便排空腹內(nèi)母乳。
2. 將小牛清洗干凈后，側(cè)放在萬級(jí)潔凈房間內(nèi)的采血臺(tái)上，固定四肢及頭部。
3. 用來蘇水清洗小牛頸部，刮去頸部牛毛，露出頸部一側(cè)皮膚，用2%碘酒擦拭消毒。
4. 在脖頸處切開一道10~20厘米的切口，避免切到血管，取出血管，用止血鉗夾住血管近心端，在遠(yuǎn)心端除去血管包膜，分離出動(dòng)脈血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管，插好管后打開近心端的止血鉗，讓牛血順采血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的采血瓶中。
5. 采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌（180℃ 2小時(shí)）后，按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口，于采血前半小時(shí)放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動(dòng)瓶?jī)?nèi)生理鹽水，使其充分濕潤瓶壁后倒出，再進(jìn)行采血并加塞封口。
6. 將采血后的采血瓶放37℃ 恒溫室2小時(shí)，再放入4℃冷庫 4小時(shí)以備離心。

（二）離心

將準(zhǔn)備好的采血瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后，對(duì)稱放入離心機(jī)，按1800轉(zhuǎn)/分鐘 離心50分鐘后，放入4℃冷庫備用。

（三）抽血清

      取出4℃冷庫離心好的采血瓶，注意輕抬輕放，以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器，再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開壓縮機(jī)，用抽血清孔的管子輕輕抽取采血瓶?jī)?nèi)的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝，即為粗制血清，放入-20℃冷庫冷藏備用。

• 血清過濾

1. 將-20℃冷庫內(nèi)的粗制血清取出化凍。
2. 將化凍后的粗制血清用經(jīng)過高壓滅菌的8層紗布進(jìn)行初濾。
3. 把初濾后的血清倒入大罐進(jìn)行混合。
4. 將裝好濾芯的濾器做密封性試驗(yàn)和發(fā)泡試驗(yàn)合格后，經(jīng)過高壓滅菌，在潔凈室內(nèi)用無菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進(jìn)行組裝，并裝上壓力表。把濾器大孔徑一端和蠕動(dòng)泵出口進(jìn)行連接。
5. 用蠕動(dòng)泵將大罐內(nèi)的血清送入濾器進(jìn)行過濾。
6. 將濾出的血清在百級(jí)凈化操作臺(tái)上進(jìn)行分裝后，即為精制小牛血清，送-20℃冷庫儲(chǔ)存。

三、注意事項(xiàng)：

1、在操作過程中，要經(jīng)常用75%的酒精對(duì)手部進(jìn)行消毒，同時(shí)避免接觸牛血或血清，特別是有傷口的部位，以免感染。

2、在采血插管過程中，插管避免接觸到未消毒的部位，盡量深入血管，使牛血能快速流完為好，并固定好插管，避免脫離動(dòng)脈血管。

3、在抽血清的過程中，控制好壓縮機(jī)的壓力大小，避免壓力過大，抽到下層的沉淀物。

4、在過濾過程中，控制好壓力的大小，避免超過濾柱工作壓力。