RPMI1640*培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號(hào)

BW12014

產(chǎn)品內(nèi)容

 使用注意事項(xiàng)

1.在配制*培養(yǎng)基前，請(qǐng)把胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素(P/S)放到2-8℃冰箱一夜解凍。

2.在使用*培養(yǎng)基前，需要把培養(yǎng)基放到37℃恒溫水浴中預(yù)熱，注意溫度不要超過37℃。

3.請(qǐng)把配制好的*培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。避免反復(fù)凍融，若培養(yǎng)基要分幾次使用，請(qǐng)將胎牛血清（FBS）、青霉素-鏈霉素(P/S)解凍按用量分裝后保存。

 產(chǎn)品用于

僅供研究使用。不適用于人或動(dòng)物體外診斷與治療。

 培養(yǎng)條件

37℃，5% CO₂，無菌恒溫培養(yǎng)。

★ 相關(guān)操作

細(xì)胞復(fù)蘇

1.把*培養(yǎng)基放入37°C水浴中預(yù)熱；
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細(xì)胞）；
3.在超凈臺(tái)中加入5ml的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）；
5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5% CO2的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.第二天，用新鮮的*培養(yǎng)基給細(xì)胞換液。

細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度超過80%時(shí)，即可傳代培養(yǎng)；

2.37℃水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺(tái)中，棄掉T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2ml PBS清洗，再加入1ml 0.25%胰酶-EDTA消化細(xì)胞；

4.在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時(shí)，即可加入5ml*培養(yǎng)基終止消化；

5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

7.棄上清，加入15-20ml的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T-75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例接種到T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中（確保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×10⁴ cells/cm² (2.5×10⁵ cells/T-25瓶），混勻細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布；

8.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO₂的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

9.每?jī)商煊眯迈r、預(yù)熱的*培養(yǎng)基進(jìn)行換液。

細(xì)胞凍存

細(xì)胞凍存可用百恩維的“無DMSO無動(dòng)物源細(xì)胞凍存液”，具體操作如下。

1. 細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對(duì)待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)；

2. 1000rpm離心5分鐘，去掉上清；

3. 根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細(xì)胞密度在1×10⁶/ml左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞密度）；

4. 輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻），將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋；

5. 將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃；

6. 第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。

注：如客戶用自己配制的凍存液凍存細(xì)胞，請(qǐng)避免用甘油作為保護(hù)劑。