新生牛血清檢測要求 

本品系從出生14小時內未進食的新生牛采血分離血清，經除菌過濾后制成。牛血清生產過程中不得任意添加其他物質成分。 新生牛血清用于生產前應逐批進行以下檢查，并應符合規定。  

蛋白質含量  應為3.5%～5.0%。 

血紅蛋白   用氰化高鐵法或其他適宜的方法測定。應不高于0.02%。

大腸桿菌噬菌體 采用噬斑法和增殖法檢測。不得有噬菌體污染。

摩爾滲透壓  （指標待定） 

無菌檢查 依法檢查，應符合規定。

支原體檢查     依法檢查，應符合規定。 

細菌內毒素檢查 應不高于10EU/ml（附錄Ⅻ E 凝膠*試驗）。

病毒檢查  

1. 細胞培養法 

（1）非血吸附病毒檢查  將新生牛血清供試品分別接種到人源（如人二倍體細胞）、 猴源（如Vero細胞）以及牛腎傳代細胞三種細胞，采用的牛腎傳代細胞系應證明無牛病毒的污染。每種細胞至少接種6瓶，每瓶細胞懸液接種量不少于培養液總量的25%。于36±1℃培養21天。接種的每種細胞都應同時設立牛血清陰性對照和病毒陽性對照，（陰性對照用牛血清應證明無牛病毒污染）。培養過程中可根據細胞生長情況更換細胞培養液，每次更換培養液前應觀察（肉眼/顯微鏡）有無細胞病變出現。培養到期后，陰性對照應無任何細胞病變出現，陽性對照應出現典型的細胞病變，試驗成立。供試品檢查應不出現任何細胞病變為陰性，符合要求。

（2）血吸附病毒檢查  將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附病毒檢查。 用0.2%~0.5%雞和豚鼠紅細胞混合懸液覆蓋于細胞表面，置2~8℃分鐘， 然后置20~25℃30分鐘， 分別進行鏡檢， 觀察紅細胞吸附情況， 供試品檢查結果均應為陰性。試驗同時應設立血吸附陽性對照。

 2. 免疫熒光抗體檢查法  采用直接或間接免疫熒光抗體檢查法，至少應對牛腹瀉病毒，牛腺病毒、牛細小病毒、 呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進行檢查，結果均應為陰性。                                           

支持細胞增殖檢查 用Sp2/0 -Ag14或適宜的非貼壁傳代細胞進行。

（1）細胞生長曲線的測定取供試品按10%濃度配制細胞培養液，按每1ml含104的細胞濃度接種細胞，每天計數活細胞，連續觀察一周，并繪制生長曲線，細胞的zui大增殖濃度應不低于每1ml含106。 

（2）細胞倍增時間的測定按生長曲線計算細胞的倍增時間。取細胞峰值前一天的細胞計數(Y)、接種細胞數(X)及生長時間(T)計算。 倍增時間=T/A  A=log2Y/X  Sp2/0-Ag14細胞的倍增時間應不超過20小時。 1.

（3）克隆率的測定 按有限稀釋法將細胞稀釋，并按每孔1個細胞的濃 度接種于96孔細胞培養板，每板至少接種48孔， 于37℃、5%二氧化碳培養1周后計算克隆率，應不低于70%。 克隆率=A/B×100%  式中 

A為細胞生長陽性孔數； 

B為接種細胞的總孔數。