如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？  

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。 

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？  

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

 3、 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀？  按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：  

（1）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。 

（2）血清分裝凍存時，須規(guī)則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。 

（3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。  

（4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。  

（5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 

（6）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。 

4、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？  

 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

5、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。 

6、 有必要做熱滅活嗎?  

實(shí)驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量!  

7、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？

 一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

（1）細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸；

（2）血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；

（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長；

（4）配制培養(yǎng)基的水

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會損失一些對細(xì)胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。 

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應(yīng)盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養(yǎng)基，血清就是作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養(yǎng)中的細(xì)胞發(fā)生變化，特別是一些二倍體的無限細(xì)胞系，迅速生長之后容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。   采購血清時，先從供應(yīng)商處索取樣品進(jìn)行試驗，選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過預(yù)先試驗的樣品代替。

*類，zui別的，是專門用于干細(xì)胞的胎牛血清

1. Hyclone的特級胎牛血清

目前，性能的血清，還是要說說Hyclone的特級胎牛血清，貨號是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。Hyclone特級胎牛血清（Defined FBS），貨號SH30070，是世界上*經(jīng)過40納米過濾的*胎牛血清，的促細(xì)胞生長作用及產(chǎn)品穩(wěn)定性。內(nèi)毒素含量≤10EU/ml，血紅蛋白含量≤10mg/dl。此血清可以廣泛用于各種細(xì)胞培養(yǎng)，包含任何干細(xì)胞系的培養(yǎng)。因為美國那邊有瘋牛病，無法進(jìn)口。實(shí)際上，40nm的過濾，已經(jīng)將全部的病毒、支原體處理掉，同時，是用于科研級別的，潔凈程度非常高。不讓進(jìn)口，只是我們國家為了保護(hù)本國畜牧業(yè)的一個手段，針對牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。

1. Gibco的特級胎牛血清

稍次一點(diǎn)的是Gibco公司在美國原裝生產(chǎn)的特級胎牛血清，這款血清，貨號是16000-044是100nm過濾3次，內(nèi)毒素和血紅蛋白含量都可以與Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培養(yǎng)大部分的干細(xì)胞系。同樣是美國來源，所以渠道特殊。

第二類，優(yōu)等胎牛血清

 1、Hyclone的加拿大優(yōu)等胎牛血清  的是Hyclone加拿大優(yōu)等胎牛血清（Characterizend FBS）SH30396 血清采自加拿大，由hyclone公司總部的員工采集加工，采集方法，加工過程，檢定標(biāo)準(zhǔn)與美國原產(chǎn)優(yōu)等胎牛血清*一致，市場*美國原產(chǎn)的。經(jīng)過3次100nm過濾，內(nèi)毒素含量≤25EU/ml，血紅蛋白含量≤25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多實(shí)驗室選擇血清的，價格適中，質(zhì)量過硬，應(yīng)用細(xì)胞非常廣泛。現(xiàn)在同樣的尷尬是，北美生產(chǎn)，屬于疫區(qū)，無法正常進(jìn)口。

 2、Hyclone的澳大利亞胎牛血清  大體與加拿大的優(yōu)等血清是一樣的，級別也非常相似，貨號是SH30084，這個血清的血源是非疫區(qū)的，所以，各種級別都有，100ml、500ml市面上都能買到。

3、Gibco的澳大利亞胎牛血清  情況和Hyclone的澳大利亞胎牛血清差不多，市場價也是3200元/500ml左右。這一級別的血清，也能用于干細(xì)胞培養(yǎng)，可是，不象特級胎牛血清那么。因為，此胎牛血清屬于澳大利亞生產(chǎn)的，不在疫區(qū)，可以正常報關(guān)進(jìn)口，目前沒有受到任何影響，所以，就目前而言，算是的胎牛血清了，有不少客戶都此血清來培養(yǎng)干細(xì)胞，效果還是比較不錯。

第三類，一般級別的進(jìn)口胎牛血清

1. Hyclone的南美胎牛血清

 目前，市場上用的zui多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS) SV30087 ，此血清采自南美，在國內(nèi)（蘭州）過濾并測試檢驗，經(jīng)三次100納米過濾，根據(jù)中國商標(biāo)法的規(guī)定標(biāo)貼中文標(biāo)簽，內(nèi)毒素含量≤10EU/ml,血紅蛋白含量≤20mg/d。 此血清廣泛用于各種腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，還沒有資料記載能夠用于干細(xì)胞，也聽說有少數(shù)人用于干細(xì)胞培養(yǎng)的，不過，因為本身血紅素比較高，所以，不要用于干細(xì)胞。

1. Gibco的南美胎牛血清

 這款血清，是Gibco針對Hyclone南美胎牛血清做的，價格比較貴，好像是1780元/500m。這款血清聽說是在北京過濾分裝的。

第四類，國產(chǎn)的各種系列胎牛血清

國產(chǎn)的胎牛血清，國內(nèi)沒有嚴(yán)格意義的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而國內(nèi)都是剖腹產(chǎn)出胎牛，8小時左右取血，然后，進(jìn)行過濾分裝。所以，國產(chǎn)的胎牛血清不是嚴(yán)格意義的胎牛血清。一般100ml價格定在200元左右，但是，遇到的問題非常多。

第五類，其他血清 依科賽，超級新生牛血清，可以用于簡單的細(xì)胞培養(yǎng)。新生牛血清，小牛血清，一般國產(chǎn)的，效果也還是不錯的，不過，不要用于細(xì)胞培養(yǎng)，這些血清，大多是用于封閉液、保護(hù)液、

緩沖液等等用途的。