操作步驟 

可能原因 

解決辦法 

  選擇試劑 

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。 

加   樣 

1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 

2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 

3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。 

1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 

2.加樣后及時(shí)放入孵箱。 

3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 

4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 

5.標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 

  孵   育 

1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 

2.孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 

1.貼封片或加蓋； 

2.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 

洗   板 

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 

2.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 

3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。 

1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 

2.大鼠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF) ELISA試劑盒合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 

  顯   色 

1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑； 

2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。 

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 

2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 

3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 

  終   止 

加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。 

加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 

讀   板 

讀板時(shí)板底不清潔。 

應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。 

全過程 

1.整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 

2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。