貝氏柯克斯體(俗稱Q熱立克次體)是常見的人畜共患病Q熱的病染原體。由于Q熱臨床表現多樣，臨床上常誤診為傷寒、上呼吸道感染、肺炎、肝炎等［1］，因而簡便而實用的診斷和流行病學調查方法的建立，對Q熱病的診、防、治均有重要意義。我們建立的免疫金法檢測Q熱立克次體，初步證明快速而實用，現將結果報告如下。
一、材料與方法
1.Q熱立克次體株及對照菌株：Q熱立克次體七醫株(Ⅰ相和Ⅱ相)，李株(Ⅰ相)，YS-8株(Ⅰ相)，Henzerling株(Ⅰ相)和九里株(Ⅱ相)及普氏立克次體均為我室保存，嗜肺軍團菌LP6，LP8抗原由大坪醫院檢驗科惠贈，綠膿假單胞菌PN103株，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌由本室保存。
2.鼠抗Q熱立克次體Ⅰ相單抗雜交瘤1B1D4D8(Ⅰ相elisa效價＞1∶12 800，Ⅱ相效價＜1∶3 200)由本室自制。按文獻［2］報道的方法標記成10 nm的膠體金探針。
3.用兔抗Q熱立克次體免疫血清包被硝酸纖維素膜(NC膜孔徑0.45 μm)，參照文獻［2］介紹的方法建立Q熱立克次體的免疫金檢測法(DIGFA)。
4.用所建立的DIGFA檢測實驗感染豚鼠血、小鼠肝脾及蜱標本中的Q熱立克次體。實驗動物的感染按我室常規進行，其中豚鼠采集感染后6、11、16、30 d取血分離的白細胞16份；小鼠肝、脾標本40份，采自20只昆明鼠受染后2、4、6、8、10、12、14、20、30 d，稱量后，用去離子水研磨成5%的懸液，1 000 g離心15 min，取上清液待檢；感染Q熱立克次體的非洲鈍緣蜱血淋巴和成蜱及其卵，下代幼蟲懸液標本共8份。
二、結果
1.探針的特異性試驗結果如表1所示。
表1 免疫金探針特異性試驗結果
Q熱立克次體菌株結果對照菌株結果七醫株顆粒性抗原++++普氏立克次體-七醫株超聲粉碎抗原++++綠膿假單胞菌PN103-九里株++++嗜肺軍團菌Lp6-李株+++嗜肺軍團菌Lp8-Henzerling株++大腸埃希菌-Ys-8株+++金黃色葡萄球菌-七醫株Ⅱ相+/-陰性對照-
注：以Q熱立克次體七醫株檢測結果為++++，陰性對照為-度量各菌株試驗結果 2.敏感性試驗：取各種稀釋度的純凈顆粒性七醫株Ⅰ相抗原各50 μl點于同一硝酸纖維素膜中，制成13個斑點。用膠體金探針做檢測，經3次重復均只有前4個斑點為陽性，即10-3，相當于50 ng的Q熱立克次體抗原。
3.實驗感染標本檢測：豚鼠感染立克次體后，不同時間內采血，用DIGFA檢測結果：小鼠感染后2 d即可用DIGFA檢測到肝、脾中立克次體抗原，6 d陽性zui強，8 d減弱，12 d后檢測為陰性，該結果與感染后小鼠脾印片經常規姬姆薩染色所見的立克次體消長相吻合。對照小鼠標本檢測均陰性。受染蜱血淋巴和成蜱懸液經檢測為陽性，而其卵、下代幼蟲及正常蜱標本均為陰性。
三、討論
聚合酶鏈反應(PCR)和核酸探針檢測立克次體，特異性和敏感性均很好［3］，但難以推廣。我們將多個標本點于同一張NC膜上進行批量標本的DIGFA檢測，且直接檢測顆粒性Q熱立克次體抗原(目前文獻報道的多是檢測抗體，如登革熱病毒抗體［4］，流行性出血熱病毒抗體［5］等)，有很好的特異性。敏感性試驗結果表明，該法至少可檢出50 ng的Q熱立克次體抗原。
DIGFA檢測豚鼠血液中Q熱立克次體的方法，可能進一步應用于Q熱病人的快速診斷。用DIGFA檢測受染小鼠脾臟的結果與常規姬姆薩染色所見的Q熱立克次體在脾臟中的消長相吻合，故可望應用于Q熱自然疫源地調查中野外嚙齒動物臟器的檢查。
參考文獻
1 俞樹榮.編著.Q熱的病原與防治.北京：科學技術文獻出版社, 1990.42-45.
2 Hayat MA. Collidal gold-principales, methods and applications. San Diego: Acad Press, 1989, 23-39.
3 余全，俞樹榮.用DNA探針技術檢出Q熱立克次體.中華微生物學和免疫學雜志，1994，14：349-351.
4 姚*. 斑點免疫金滲濾法檢測血清中抗登革熱病毒IgM抗體的研究. 陜西醫學檢驗, 1997, 12: 18-19.
5 趙中夫, 郭進軍, 閻小君. 滴金免疫法快速檢測腎綜合征出血熱血清特異性IgM的研究. 中華醫學檢驗雜志, 1998, 21: 96-98.