乙酰輔酶A/乙酰輔酶A鈉鹽/Acetyl CoA |
葡萄糖氧化酶/GOX/GOD/Glucose oxidase |
D-α-氨基氧化酶/D-氨基酸氧化酶/D-AAO |
L-氨基酸氧化酶/L-AAO/TM-LAO/L-amino acid oxidase |
己糖激酶/己糖磷酸激酶/HK/Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae |
胃蛋白酶(豬胃粘膜)/胃液素/胃朊酶/蛋白酵素/酸腈酶/百布圣/Pepsin(porcine stomach mucose) |
胰酶粉/胰酵素/胰醇素/胰液素/Pancreatin |
胰蛋白酶(牛胰)/Trypsin(bovine pancreas) |
胰蛋白酶(豬胰)/Trypsin(porcine pancreas) |
脂肪酶(豬胰)/脂酶/脂肪水解酶/脂肪分解酵素/三酰基甘油酰基水解酶/PPL/Lipase(pocine pancreas) |
過氧化氫酶(牛肝)/氯化酵素/CAT/Catalase(bovine liver) |
溶菌酶(蛋清)/脆壁質酶/球蛋白G/N-乙酞胞壁質聚糖水解酶/Lysozyme(Chinken egg) |
溶葡球菌酶/溶葡萄球菌酶/Lysostaphin |
氯化溶菌酶/溶菌酶氯化物/Lysozyme chloride |
纖維素酶(綠色木霉)/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase(Trichoderma Vride G) |
纖維素酶R-10/1,4-β-D-葡聚糖葡糖苷水解酶/Cellulase Onozuke R-10 |
半纖維素酶/Hemicellulase |
PPO的存在是水果、蔬菜褐變及營養喪失的主要原因之一。PPO氧化內源的酚類物質生成鄰醌,鄰醌再相互聚合成醌或蛋白質、氨基酸等作用生成高分子絡合物而導致褐色素的生成,色素分子量愈高,顏色愈暗。多酚氧化酶活性高低也是馬鈴薯解除休眠的指標之一。
本實驗將采用馬鈴薯為主要材料,通過組織細胞破碎勻漿、過濾、離心、硫酸銨沉淀、透析等步驟獲得PPO的粗酶液。
通過本項實驗,學習和了解蛋白質的提取、分離的基本原理和方法,掌握相關儀器設備的操作使用,以及蛋白質的提取、分離的系統技術。
操作步驟
1:粗酶提取:
水果肉組織按1:1(W/V)比例與003M磷酸緩沖液PH6.0(內含0.02M巰基乙醇,0.001MEDTA,5%甘油,1%聚乙烯吡咯烷酮)混合,勻漿4層后紗布過濾,濾液以6000rpm離心10min,棄除沉淀獲得酶提取液。
2:鹽析分級沉淀:
在酶提取液中加入固體硫酸銨使其達到40%飽和度(邊加邊攪拌達到充分溶解),然后6000rpm離心20min棄除沉淀;離心上清液在加入固體硫酸銨達到70%飽和度(邊加邊攪拌達到充分溶解),再以6000rpm離心20min,棄除上清夜,收集粗酶沉淀。
四、實驗結果
獲得PPO粗酶液。
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