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牛口蹄疫3ABC抗體elisa試劑盒使用說明書

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2012年09月21日 15:04  

          牛口蹄疫3ABC抗體elisa試劑盒使用說明書
上海滬峰是一家集銷售生化試劑、實驗耗材、自產分子生物學產品為一體,并能提供的專業性生物科技公司。公司秉承“以客戶為中心,以產品為保障、以誠信為基礎、以創新為宗旨”的發展理念,在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長。

使用目的:
  本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中口蹄疫3ABC抗體含量。
elisa試劑盒實驗原理
  本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中牛口蹄疫3ABC抗體水平。用純化的牛口蹄疫3ABC抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入牛口蹄疫3ABC抗體,再與HRP標記的牛口蹄疫3ABC抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胃動素(MTL)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人胃動素(MTL)濃度。
elisa試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(480ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
elisa試劑盒標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液


加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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