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血清結晶紫的配制

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2012年08月27日 11:57  

血清結晶紫的配制

隨著熒光定量PCR技術的成熟和熒光定量PCR儀的普及,用傳統的半定量方法檢測目的基因表達量的升高或者降低,已經遠遠不能滿足當前科研的需要,針對當前研究的熱點基因,閃晶生物及時地從美國biosuper公司引進不同物種、不同基因的熒光定量PCR檢測試劑盒。該試劑盒包含了目的基因和內參基因的引物、taqman探針(熒光探針)、反轉錄試劑、熒光定量PCR試劑、操作說明書等,用戶只需將提好的RNA加入就可以進行熒光定量PCR實驗,操作方便簡單、適合多種熒光定量PCR儀,同時也避免了自己設計、合成引物探針的煩惱。目前主要是人、大鼠、小鼠的大部分基因,其它物種的基因需來電或來信咨詢。
首先,:含 1%結晶紫的無水乙醇,過濾,除去雜質; 染色方法:用 PBS 緩沖液 洗細胞 1-2 次,吸盡殘余的液體.加入甲醇固定 20 分鐘,棄固定液,晾干,加入結晶紫染 液,染色 10-20 分鐘,棄染色液,用水沖洗干凈即可
分離單個核細胞實驗操作步驟
1.無菌靜脈穿刺采血,肝素抗凝(20 u/ml 全血) ,并加等量生理鹽水稀釋。 2.在 15 ml 離心管中加入 4 ml 淋巴細胞分離液(室溫) ,吸取 6 ml 經稀釋的抗凝血,小心滴加到分離液液面 上。 (此步小心操作,勿將血液與分離液混合。 ) 3.室溫下離心,2000 rpm,15 min,離心后液體分 4 層,從上至下分別為:血漿層、單個核細胞層、淋巴細 胞分離液層、紅細胞及多形核細胞層。 (附圖) 4.用吸管小心吸取中間混濁懸浮顆粒層(hPBMC 層) ,轉到新的離心管內,每管zui多加 5 ml 細胞懸液,補加 PBS 至 10 ml,吹勻。

5.離心,2000 rpm,10 min,棄上清,再次加 10 ml PBS 洗滌沉淀。離心,1500 rpm,6 min,棄上清。 6.每支離心管加 3 ml RPMI 1640 培養液(含 10%胎牛血清、100 u/ml 青霉素、100 u/ml 鏈霉素) ,吹勻制成 細胞懸液。 7.取 90 µl 細胞懸浮液與 10 µl 0.4%臺盼藍溶液加入 1.5 ml EP 管中,混勻。 8.立即取 10 µl 混合液從血球計數板計數池上方凹槽加入,蓋上蓋玻片,于 100 倍倒置顯微鏡下觀察計數,活 細胞不染色,死細胞則為藍色。

公司是一家技術服務型渠道企業,在行業發展中所承擔的角色是一種溝通產出方和需求方(科研和市場)的媒介,我們致力為行業人才提供了包括科研在內的更多出口,為科研提供了有力的硬件支持,有效地促進科研和市場需求結合,提高了科研成果的轉化效率,使得科研更具活力。目前國家對于生物行業的發展給予了極大的重視,但更多地側重于科研的投入,行業內缺乏*的技術服務體系和渠道支撐...

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