ApoH捕獲BAC試劑盒

ApoH捕獲BAC試劑盒

描述：

ApoHCaptoBAC試劑盒在大多數樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有ApoH的磁珠和一種特別開發的緩沖液，以確保最佳的細菌捕獲。

樣品按照試劑盒說明在緩沖液中稀釋后加入磁珠。短暫振蕩后，將上清液移除，磁鐵（未提供）固定磁珠以保持其在底部。然后細菌在磁珠上濃縮，并且沒有潛在的抑制劑。可以使用常規檢測方法進行分析。

該產品的保質期為2年，需在28°C保存。該產品有兩種測試格式，分別為25或50。

參考編號：MP1001150T

• 數量：50個測試

• 價格：839 €（不含稅）

成分：

• 1 mL ApoH 磁珠 (參考編號: MP200011ML)

• 50毫升緩沖液TTGB 10X（編號：TP1000450ML）

ApoHCaptoBAC 試劑盒

參考文獻：MP10011

僅供研究使用

28°C

參考文獻

 有效期

 儲存溫度范圍：28°C

 批號

 參考編號

ApOHO

提升靈敏度，改進診斷水平

 一、簡介

ApoH 是一種血漿蛋白，能夠結合包括病毒（12）、真菌（3）和細菌（46）在內的微生物。ApoH 蛋白也被稱為載脂蛋白 H 或β2 糖蛋白 1。其多特異性特點使得多種微生物的多重檢測成為可能。這種親和捕獲方法操作簡單、溫和且快速，能夠讓微生物保持活性和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離，從而更易于通過常用的特異性技術進行鑒定/檢測，進而提高了檢測靈敏度（710）。

這些特性使得 ApoHCaptoBAC 試劑盒成為一種創新的樣本預處理工具，可用于細菌分離前的操作，以便進行靈敏的鑒定/檢測。

 二、原理

在 ApoHCaptoBAC 試劑盒中，ApoH 與磁珠結合。該試劑盒配備了一種特殊的結合緩沖液，可增強 ApoH 對細菌的親和力。將 ApoH 磁珠添加到任何復雜的生物介質中，并在提供的緩沖液中進行稀釋。初始樣本及其潛在抑制劑可以被去除，而通過 ApoH 與磁珠連接的捕獲細菌則利用磁鐵保留在試管中。然后，細菌即可用于通過分子技術（如 PCR）、免疫檢測（如 ELISA、WB）或在適當培養基中培養等方法進行鑒定/檢測。

 三、試劑

 參考文獻 MP20001  ApoH 磁珠

ApoH 包被磁珠懸浮液中，每毫升含有\(10^{13}\)個直徑約為 200 nm 的磁珠，懸浮在含有\(<0.02\%\)疊化鈉的緩沖液中。

 參考文獻 TP10004  10X TTGB 緩沖液

10X TTGB 緩沖液是一種淺黃色水性結合緩沖液，經 0.2 µm 過濾且為 10 倍濃縮液。按以下說明進行稀釋。

注意：試劑盒中包含的所有試劑均可單獨購買。

 四、儲存

 所有試劑在室溫下運輸時功能不受影響，收到后請儲存于 28°C。

 所有試劑在 28°C 下可保持穩定直至有效期。

 ApoH 磁珠小瓶應直立存放，以確保磁珠始終處于儲存溶液中。

 使用后，所有試劑應迅速儲存于 28°C。

 五、所需材料（未提供）

 無菌蒸餾水。

 合適的微量移液器和無菌過濾吸頭。

 合適的反應管，玻璃或塑料材質（僅限聚丙烯，避免使用聚苯乙烯）。

 孵育過程中用于樣本攪拌的合適設備。

 可調節至適當溫度的培養箱。

 層流柜或針對目標微生物類型所需的特定微生物環境。

 與試管兼容的側向吸引專用磁性裝置；請注意，不同市售磁鐵的吸引效率和速度有所不同。

 用于揭示目標微生物所需的材料和試劑。

 六、安全與注意事項

 為了更好地保持穩定性，所有試劑的處理必須小心，避免任何污染。

 是否需要無菌工作區域將取決于捕獲微生物的用途（培養時為必需）。

 ApoH 磁珠儲存緩沖液中含有\(<0.02\%\)的疊化鈉。疊化鈉的痕量不會干擾捕獲過程，也不會影響微生物的活性：使用前無需洗滌磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道發生反應，形成爆炸性金屬疊氮化物。通過管道處理時，需用大量水沖洗，以防止疊氮化物積聚。

 ApoH 是一種源自人類的蛋白質。盡管這種蛋白質是從血漿或血清中純化而來，并且在采集時根據歐洲法規不含感染性因子（HIV、HBV、HCV），但仍建議將 ApoH 磁珠作為潛在感染性產品進行處理。

 試劑和標本的處理應符合良好的實驗室規范。未使用的試劑、樣本和廢物的處理應符合當地法規。

 請勿使用過期試劑。

 七、重要說明

本方案旨在為最多 5 mL 樣本中的細菌結合提供一般指導。根據細菌菌株、樣本性質和體積，可能需要進一步優化以實現最佳結合能力。ApoH 捕獲的機制不同于常規的抗原抗體相互作用。為確保您的實驗取得更好的成功，請聯系我們的技術支持

在細菌捕獲之前，ApoH 磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、在高溫（>60°C）或極 pH（>9 或 <5）條件下處理。如果需要保留有活力的微生物，捕獲后也應采取同樣的注意事項。

 僅在懷疑微生物負載較高時增加磁珠體積。磁珠能夠結合大量微生物：1 µL 磁珠可從純培養物中結合\(1×10^{7}\)個大腸桿菌。

 八、樣本采集與處理

我們目前的數據表明，ApoH 磁珠可以捕獲各種固體（懸浮后）或液體樣本中的細菌。

 將固體樣本（如肉類、組織）在稀釋至 1X 的捕獲緩沖液中研磨。然后在添加磁珠之前，用無菌紗布過濾混合物，否則磁珠可能會被樣本碎片卡住，無法被磁化。

 優先使用新鮮樣本，避免混合樣本。混合的血液、混合的血清或混合的血漿可能會形成凝塊，能夠捕獲和聚集磁珠，從而使磁珠無法用于結合微生物。

 在細菌添加的情況下，使用臨床菌株而非“標準”細菌（如 ATCC 菌株 = 美國典型培養物保藏中心菌株）。實際上，許多標準細菌會失去對 ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的吸引力。

 使用全血時，選擇 EDTA 抗凝劑。

 所有稀釋或處理后的樣本應迅速與 ApoH 磁珠接觸。

 樣本體積可按比例放大或縮小。如果懷疑微生物滴度較低，可按比例放大樣本體積。對于體積超過 5 mL 的樣本，請聯系我們的技術支持。

受損的微生物可能會失去對 ApoH 蛋白或 ApoH 衍生的 Peps6 分子的親和力，因此：

 優先使用新鮮材料。

 檢查冷凍樣本中細菌的活力。應避免樣本的反復凍融循環。

 使用質量較差的起始材料會導致靈敏度降低。

 九、使用說明

 樣本在捕獲緩沖液中的稀釋

將樣本在捕獲緩沖液中稀釋，然后渦旋。樣本稀釋后緩沖液的最終濃度必須為 1X：

 小體積樣本（1199 µL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 1X 濃度。向樣本中加入足夠的 1X TTGB 緩沖液，使總體積達到 1 mL。

 大體積樣本（0.25.0 mL）：將 10X TTGB 緩沖液在無菌蒸餾水中稀釋至 2X 濃度。將 1 體積的 2X TTGB 緩沖液加入 1 體積的樣本中。

 捕獲

 使用前，通過輕輕吸液或手動倒置小瓶底重懸 ApoH 磁珠（請勿渦旋）。

 每個樣本添加 20 µL ApoH 磁珠。

 輕輕混勻（請勿渦旋）。

 在 3537°C 下適當攪拌孵育 30 分鐘：試管應保持直立并劇烈攪拌，以使 ApoH 磁珠保持懸浮狀態。例如，將 Thermomixer 設置為 1000 rpm。

 將反應管置于磁鐵上，直至所有 ApoH 磁珠側向沉淀且上清液變澄清。

 丟棄上清液，不要擾動 ApoH 磁珠沉淀。此時細菌已濃縮在沉淀中。

 洗滌（可選）

純培養物、血漿或血清無需洗滌。全血等復雜樣本可能需要洗滌：

 在磁鐵上的磁珠沉淀上輕輕加入 1 mL PBS（不含\(Ca^{2+}/Mg^{2+}\)）。不要懸浮磁珠。

 丟棄上清液，不要擾動 ApoH 磁珠沉淀。

 如有需要，重復洗滌步驟一次。

 十、細菌檢測

結合的細菌可使用您的標準方案直接在 ApoH 磁珠上進行檢測，必要時可進行調整。注意：對于小體積樣本，在添加重懸液之前對磁珠沉淀進行短時間離心。

 培養：將 ApoH 磁珠重懸于適當的培養基中。直接將懸浮液接種到培養皿中。在細菌的最適溫度下孵育。

 PCR：將 ApoH 磁珠重懸于您的裂解緩沖液中。劇烈渦旋 15 秒以破壞磁珠沉淀。裂解步驟后，通過磁鐵或在 10,000 g 下離心 1 分鐘去除 ApoH 磁珠。將上清液轉移到新管中。按照您常用的 DNA 提取和 PCR 方案進行操作。

 顯微鏡觀察：將 ApoH 磁珠重懸于 PBS 或您的特定培養基中。磁珠無自發熒光，可用于熒光應用。

 其他：將 ApoH 磁珠重懸于適合其他應用的適當溶液中。有關其他特定應用，請聯系我們的技術支持。

 十一、故障排除

以下提供一些指導原則。如有任何剩余問題、需要進一步信息或需要針對您的特定應用定制方案，請聯系我們的技術支持

 磁珠和緩沖液的處理

 在無菌環境中打開 ApoH 磁珠小瓶：污染會降低穩定性并影響效率。

 始終將 ApoH 磁珠添加到樣本中，而不是相反。

 使用無菌蒸餾水進行緩沖液稀釋。檢查樣本中混合后的 TTGB 緩沖液確實為 1X 濃度。

 檢查 TTGB 緩沖液是否未被污染。

 根據微生物或樣本的不同，捕獲緩沖液的選擇和用量可能需要優化。

 大體積樣本

 大體積樣本（5100 mL）需要比試劑盒中包含的更多磁珠和緩沖液。它們可以單獨購買。

 樣本在捕獲緩沖液中的稀釋：將 2X 或 10X 濃縮的 TTGB 緩沖液直接添加到樣本中，以達到 1X 最終緩沖液濃度。

 每個樣本添加 20 µL ApoH 磁珠，除非樣本超過 10 mL。如果是這樣，可能需要增加磁珠體積。

 超過 20 mL 的樣本可以通過軌道攪拌（將輪子設置為 3 rpm）代替 1000 rpm 的直立攪拌進行攪拌。

 大體積樣本需要時間達到合適的溫度。在添加磁珠之前，讓樣本達到室溫或孵育溫度。

 孵育

 遵守孵育的溫度和時間，以確保獲得最佳結果。

 選擇足夠大的試管以確保正確攪拌，例如：使用 1.5 mL 試管進行 1 mL 反應。

 試管應保持直立（小試管和中試管）并劇烈攪拌，以使磁珠保持懸浮狀態。例如，將 Thermomixer 設置為 1000 rpm。

 僅使用玻璃或聚丙烯塑料管，避免使用聚苯乙烯。

 磁化

 如果上清液中仍有一些磁珠或磁珠沉淀被吸頭破壞，增加磁化時間。通常，此步驟的時間范圍為 2 分鐘（對于細胞培養）至 15 分鐘（對于全血）。

 使用高能量釹磁鐵（812 kg 吸引力），以確保磁珠全磁化。低磁力磁鐵會導致磁珠和微生物損失。太強的磁鐵可能會將磁珠嵌入塑料管中。

 在吸出上清液之前，去除漂浮的氣泡。

 不要讓磁珠磁化超過 30 分鐘。微生物的完整性可能會受到損害。

 洗滌

 細胞上清液、血漿或血清無需洗滌，除非檢測系統非常敏感。全血等復雜樣本可能需要對磁珠沉淀進行 2 次洗滌。在磁鐵上洗滌。切勿在洗滌溶液中渦旋磁珠。

 PBS 可以用另一種洗滌緩沖液代替。聯系我們的技術支持以檢查其與該程序的兼容性。

 檢測

 一些細菌物種在捕獲后無法生長。這些細菌處于有活力但不可培養的狀態。通過顯微鏡或 PCR 檢查捕獲情況。

 在適用的情況下，裂解步驟對于成功檢測微生物至關重要。裂解緩沖液的效率在很大程度上取決于化學配方，并且可能因供應商而異。如果可能，添加裂解對照以檢查效率。不要猶豫在裂解緩沖液中劇烈渦旋 ApoH 磁珠。

 如果需要進行光密度測量，請用磁鐵去除磁珠，僅測試上清液。磁珠呈深棕色，會極大地干擾光學測量。

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