師兄支招|如何避免胎牛血清出現沉淀?
甲:遇到過血清解凍后出現絮狀沉淀,其實是纖維蛋白析出。后來改成逐步解凍(4℃過夜→室溫復溫),解凍時輕輕搖晃,沉淀明顯減少;如果已經產生沉淀,用 3000rpm 離心 10 分鐘,上清液可正常使用,不影響細胞培養。
乙:遇到血清沉淀,首先判斷沉淀類型。若是纖維蛋白析出造成的絮狀沉淀,可400 - 600g離心5 - 10分鐘,取上清使用,不影響血清活性。若沉淀較多且性質不明,可將血清在37℃水浴短暫加熱,使蛋白溶解,再輕柔混勻。注意避免劇烈搖晃,防止產生更多沉淀。同時,盡量采用2 - 8℃緩慢解凍血清,減少反復凍融,能從源頭降低沉淀產生幾率。
沉淀形成并非偶然,而是多種因素共同作用的結果:
1、溫度波動
血清在反復凍融或儲存溫度不穩定(如未嚴格保持在 - 20°C 或更低)時,蛋白質溶解度下降,極易析出。這就好比在炎熱的夏天,原本溶解在水中的糖,當水溫降低時,多余的糖就會結晶析出。
2、物理應力
劇烈搖晃、震蕩或不當的移液操作(產生氣泡)會破壞溶液中蛋白質的穩定狀態,促使聚集。想象一下平靜的湖面,當被外力劇烈攪動時,水面會泛起層層漣漪,甚至形成漩渦,血清中的蛋白質在物理應力的作用下也是如此。
3、時間因素
長期儲存,尤其是不理想條件下,沉淀形成幾率顯著增加。就像存放時間過長的食物會變質一樣,血清在不良儲存環境下,隨著時間的推移,其內部成分也會發生變化,導致沉淀的產生。
4、成分特性
血清本身富含易沉淀物質,如纖維蛋白原(凝血關鍵因子)、脂蛋白及礦物質離子。這些成分的存在,使得血清在特定條件下更容易出現沉淀現象。
患于未然
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