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Peps6-捕獲BAC試劑盒

描述：

Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開發的緩沖液，以確保最佳的細菌捕獲。 根據試劑盒說明，將樣本稀釋在緩沖液中，然后加入磁珠。經過短暫的振蕩孵育后，去除上清液，同時磁鐵（不提供）將磁珠固定在下方。然后細菌在磁珠上濃縮，并且沒有潛在的抑制劑。它們可以用常規檢測方法進行分析。 該產品的保質期為2年，保存在2-8°C。該產品有25或50測試格式可供選擇。

參考編號：MP10031-50T

• 數量：50次測試

成分：

• 1 mL的Peps6磁珠（編號：MP20006-1ML）

• 50毫升緩沖液TTGB 10X（編號：TP10004-50ML）

Peps6-捕獲BAC試劑盒

描述：

Peps6-CaptoBAC試劑盒在大多數樣本中進行細菌捕獲。它包括涂有Peps6的磁珠和一種特別開發的緩沖液，以確保最佳的細菌捕獲。 根據試劑盒說明，將樣本稀釋在緩沖液中，然后加入磁珠。經過短暫的振蕩孵育后，去除上清液，同時磁鐵（不提供）將磁珠固定在下方。然后細菌在磁珠上濃縮，并且沒有潛在的抑制劑。它們可以用常規檢測方法進行分析。 該產品的保質期為2年，保存溫度為2-8°C。該產品有25或50測試格式可供選擇。

參考編號：MP10031-25T

• 數量：25次檢測

成分：

• 0.5 mL的Peps6磁珠（參考編號：MP20006-0.5ML）

• 25 毫升緩沖液 TTGB 10X（參考編號：TP10004-25ML）

1. 簡介

合成分子 Peps6 源自載脂蛋白 H（ApoH），保留了其結合微生物的能力，包括病毒（1-2）、真菌（3）和細菌（4-6）。ApoH 蛋白也稱為載脂蛋白 H 或 β2 - 糖蛋白 1，其多特異性允許對多種微生物進行多重捕獲。這種親和捕獲方法簡單、溫和且快速，可使微生物保持活力和感染性。捕獲的微生物被濃縮并與潛在抑制劑分離，從而更易通過常規特異性技術（如 PCR、ELISA 等）進行鑒定 / 檢測，顯著提升靈敏度（7-10）。
這些特性使 Peps6-CaptoBAC 試劑盒成為一種創新的樣品預處理工具，用于細菌分離，以便進行高靈敏度的鑒定 / 檢測。

2. 123原理

在 Peps6-CaptoBAC 試劑盒中，Peps6 與磁珠結合。試劑盒提供一種特殊結合緩沖液，可增強 Peps6 對細菌的親和力。將 Peps6 磁珠加入任何復雜生物樣本中（用提供的緩沖液稀釋），樣本中的初始雜質和潛在抑制劑可被去除，而通過 Peps6 與磁珠結合的細菌則通過磁鐵保留在試管中。隨后，細菌可通過分子技術（PCR）、免疫檢測（ELISA、WB）或在合適培養基中培養等方法進行鑒定 / 檢測。

3. 45試劑

REF MP20006 – Peps6 磁珠
合成 Peps6 包被的磁珠懸浮液濃度為1013個珠子 / 毫升，珠子直徑約 200 nm，緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉。
REF TP1006704 – TTGB 10X 緩沖液
TTGB 10X 緩沖液為淺黃色水性結合緩沖液，經 0.2 µm 過濾，濃縮 10 倍，使用前需按說明稀釋。
注意：試劑盒中89的所有試劑均可單獨購買。

4. 10存儲

• 所有試劑可在室溫下運輸，功能不受影響；收到后需存儲于           2-8°C。

• 所有試劑在 2-8°11C 下可穩定保存至有效期。

• Peps6 磁珠瓶需12直立存放，確保磁珠始終浸沒在存儲液中。

• 使用后，所有試劑需13迅速放回 2-8°C 存儲。

5. 14所需材料（未提供）

• 無菌蒸餾水。

• 合適的微量移液器和無菌濾芯吸頭。

• 合適的反應管（玻璃或聚丙烯塑料材質，避免聚苯乙烯）。

• 孵育過程中用于樣品15攪拌的設備。

• 溫控培養箱。

• 層流罩或目標微生物所需的特定微生物環境。

• 與試管兼容的側向磁16吸裝置（注意：不同市售磁鐵的吸引力和速度可能不同）。

• 目標微生物檢測所需17的材料和試劑。

6. 18安全注意事項

• 為確保穩定性，所有試劑需小心處理，避免污染。

• 是否需要無菌操作區19域取決于捕獲微生物的用途（如需培養則必須無菌）。

• Peps6 磁珠存儲20緩沖液含 < 0.02% 疊化鈉，痕量疊化鈉不影響捕獲或微生物活力，使用前無需清洗磁珠。疊化鈉可能與銅或鉛管道反應生成爆炸性疊氮化物，通過管道處理時需用大量水沖洗，防止疊氮化物堆積。

• 試劑和樣本需按照良21好實驗室規范處理，未使用的試劑、樣本和廢棄物需按當地法規處置。

• 請勿使用過期試劑。22

7. 23重要提示

本方案為最多 5 mL 樣本中細菌結合的通用指南，根據細菌菌株、樣本性質和體積，可能需要進一步優化以實現最佳結合能力。
ApoH 捕獲機制不同于24常規抗原 - 抗體相互作用，如需確保實驗成功，請聯系我們的技術支持。
捕獲細菌前，Peps62526磁珠不得渦旋、冷凍、干燥、高溫（>60°C）或端 pH（>9 或 < 5）處理。若需保留微生物活力，捕獲后也需遵循同樣注意事項。

• 若懷疑微生物負載較27高，可增加磁珠體積。磁珠可結合大量微生物：1 µL 磁珠可從純培養物中結合1×107個大腸桿菌。

8. 28樣本采集與處理

現有數據表明，Peps6 磁珠可捕獲各種固體（懸浮后）或液體樣本中的細菌。

• 固體樣本（如肉類、29組織）需在 1X 捕獲緩沖液中研磨，過濾后再加入磁珠，否則磁珠可能被樣本顆粒卡住，無法磁化。

• 優先使用新鮮樣本，30避免混合樣本。混合血液、血清或血漿可能形成凝塊，捕獲并聚集磁珠，使其無法結合微生物。

• 若進行細菌添加實驗31，需使用臨床菌株而非 “標準菌株”（如 ATCC 菌株），許多標準菌株對 ApoH 蛋白或 Peps6 分子的親和力會下降。

• 使用全血時，需選擇32EDTA 抗凝劑。

• 所有稀釋或處理后的33樣本需迅速與 Peps6 磁珠接觸。

• 樣本體積可按比例調34整，若懷疑微生物滴度較低，可擴大樣本體積。超過 5 mL 的樣本，需聯系技術支持。
            受損微生物可能失去對 A35poH 蛋白或      Peps6 分子的親和力，因此：

• 優先使用新鮮樣本材料。

• 檢查冷凍樣本中細菌36的活力，避免樣本反復凍融。

• 使用劣質樣本會導致37靈敏度下降。

9. 38使用說明

樣本在捕獲緩沖液中的稀釋
將樣本稀釋于捕獲緩沖液中并渦旋，稀釋后緩沖液終濃度必須為 1X：

• 小體積樣本（1-199 µL）：將 TTGB 10X 緩沖液用無菌蒸餾水稀釋至 1X，加入足夠的 1X TTGB 緩沖液，使樣本總體積達到 1      mL。

• 大體積樣本（039.2-5.0 mL）：將 TTGB 10X 緩沖液用無菌蒸餾水稀釋至 2X，按 1:1 體積比加入樣本中。

捕獲步驟 40

• 使用前，通過輕柔吹打或手動倒置底重懸 Peps6 磁珠（切勿渦旋）。

• 每個樣本加入 20 41µL      Peps6 磁珠。

• 輕輕混勻（切勿渦旋42）。

• 在 35-37°C 下43適當攪拌孵育 30 分鐘：試管需直立并劇烈攪拌，使磁珠保持懸浮狀態（如設置 Thermomixer 為 1000 rpm）。

• 將反應管置于磁鐵上44，直至所有磁珠側向沉淀且上清液澄清。

• 棄去上清液，避免擾45動磁珠沉淀，細菌即濃縮于沉淀中。

洗滌（可選）46
純培養物、血漿或血清無需洗滌，全血等復雜樣本可能需要洗滌：

• 向磁鐵上的磁珠沉淀中輕輕加入 1 mL      PBS（不含Ca2+/Mg2+），勿重懸磁珠。

• 棄去上清液，避免擾47動沉淀。

• 如需可重復洗滌一次48。

10.49 細菌檢測

結合的細菌可直接在 Peps6 磁珠上通過標準方案檢測（必要時可調整）。注意：小體積樣本需在加入重懸液前短暫離心磁珠沉淀。

• 培養：將磁50珠重懸于合適培養基中，直接涂布于培養皿，在細菌適宜溫度下孵育。

• PCR：將51磁珠重懸于裂解緩沖液中，劇烈渦旋 15 秒以破壞沉淀。裂解后，通過磁鐵或離心（10,000 g，1 分鐘）去除磁珠，轉移上清液至新管，按常規流程提取 DNA 并進行 PCR。

• 顯微鏡觀察52：將磁珠重懸于 PBS 或特定培養基中，磁珠無自發熒光，可用于熒光檢測。

• 其他方法：53將磁珠重懸于適當溶液中，如需其他特定應用，請聯系技術支持。

11.54 故障排除

以下為常見問題指南，如需進一步幫助或定制方案，請聯系技術支持。
磁珠和緩沖液處理55

• 需在無菌環境中打開 Peps6 磁珠瓶，污染會降低穩定性和效率。

• 必須將磁珠加入樣本56中，而非反向操作。

• 使用無菌蒸餾水稀釋57緩沖液，確保混合后 TTGB 緩沖液為 1X 濃度。

• 檢查 TTGB 緩沖液58是否污染。

• 根據微生物或樣本類59型，可優化捕獲緩沖液的選擇和用量。

大體積樣本 60

• 5-100 mL 大體積樣本需額外購買磁珠和緩沖液。

• 樣本稀釋：直接加入612X 或 10X 濃縮的 TTGB 緩沖液，使終濃度為 1X。

• 每個樣本加入 20 62µL 磁珠，超過 10 mL 的樣本可能需要增加磁珠體積。

• 超過 20 mL 的樣63本可采用軌道攪拌（設置為 3 rpm）代替直立攪拌。

• 大體積樣本需預溫至64室溫或孵育溫度后再加入磁珠。

孵育
-65 嚴格遵循溫度和時間以確保最佳結果。

• 選擇足夠大的試管以66保證充分攪拌（如 1 mL 反應用 1.5 mL 試管）。

• 試管需直立并劇烈攪67拌（如 1000 rpm），使用玻璃或聚丙烯試管，避免聚苯乙烯。

磁化
-6869 若上清液中殘留磁珠或沉淀被吸頭擾動，需延長磁化時間（細胞培養樣本通常 2 分鐘，全血樣本可達 15 分鐘）。

• 使用高能釹磁鐵（870-12 kg 吸引力）確保磁珠全磁化，磁力過低會導致磁珠和微生物損失，過強可能使磁珠嵌入塑料管。

• 吸棄上清液前需去除71氣泡。

• 磁化時間不得超過 3720 分鐘，以免破壞微生物完整性。

洗滌
-73 細胞上清液、血漿或血清無需洗滌（除非檢測系統高度敏感），全血等復雜樣本可能需要洗滌 2 次，洗滌時需在磁鐵上操作，切勿渦旋。

• PBS 可替換為其他74洗滌緩沖液，需聯系技術支持確認兼容性。

檢測
-75 部分細菌捕獲后無法培養（處于活但不可培養狀態），需通過顯微鏡或 PCR 驗證捕獲效果。

• 裂解步驟至關重要，76裂解緩沖液效率取決于化學組成，建議添加裂解對照，可劇烈渦旋磁珠以確保裂解充分。

• 如需光密度測量，需77用磁鐵去除磁珠，僅檢測上清液（磁珠呈深棕色，會嚴重干擾光學測量）。

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