熒光濾光片的選型要點:
1. 熒光染料匹配
激發波長:濾光片的中心波長需與染料的最大激發波長一致。
發射波長:濾光片的帶寬需覆蓋染料的發射光譜,同時避免與其他染料重疊。
案例:
FITC(異硫氰酸熒光素):激發波長495 nm,發射波長519 nm。
激發濾光片:480/40 nm(中心波長480 nm,帶寬40 nm)。
發射濾光片:535/30 nm。
2. 系統兼容性
光路設計:
顯微鏡:需考慮物鏡數值孔徑(NA)和濾光片安裝方式(轉盤式、滑塊式)。
流式細胞儀:需與激光波長(如488 nm、633 nm)匹配。
尺寸與接口:
顯微鏡濾光片:直徑通常為25 mm或圓形(如φ25.4 mm)。
流式細胞儀濾光片:多為方形或定制尺寸。
3. 性能參數
透射率:優質濾光片透射率應>90%(中心波長處)。
截止深度:OD>6可有效阻擋雜散光。
溫度穩定性:高溫環境下(如激光照射)需選擇耐熱材料(如熔融石英)。
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